[發(fā)明專利]基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)同時(shí)檢測(cè)多種環(huán)境激素的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710087666.9
• 申請(qǐng)日: 2017-02-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106996923A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁利;蘇榮欣;夏寅強(qiáng);齊崴;王利兵
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 丁利;蘇榮欣;夏寅強(qiáng);王利兵;齊崴
• 主分類號(hào): G01N21/552
• 分類號(hào): G01N21/552;G01N33/74
• 代理公司: 天津創(chuàng)智天誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)12214
• 代理人: 陳昌娟

1.一種基于再生液優(yōu)化的表面等離子共振技術(shù)同時(shí)檢測(cè)多種環(huán)境激素的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)傳感芯片表面包被原或抗體的固定：將各環(huán)境激素殘留組分的包被原或抗體混合至混合液的體積為50-150μL，所述各包被原或抗體在所述混合液中的濃度均為5-20μg/mL，再利用活化酯法將所述混合液固定在所述傳感芯片表面固定；

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用0.01-0.1mol/LpH為6-8的羥乙基哌嗪乙硫磺酸鹽緩沖液配置各殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液的濃度均為0.1-1mg/mL；

量取各標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液，配制其相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)原液；用羥乙基哌嗪乙硫磺酸鹽緩沖液將標(biāo)準(zhǔn)原液配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液與過(guò)量的固定濃度的相應(yīng)抗體或包被原混合孵化，得到不同濃度的待測(cè)物混合液；

(3)測(cè)試再生液洗脫能力：測(cè)試HCl溶液、NaOH溶液、氯化鎂溶液和甘氨酸-鹽酸溶液對(duì)于步驟(1)得到的傳感芯片表面各環(huán)境激素抗體的洗脫情況，選出各組分的最佳再生條件，并對(duì)比其再生液洗脫能力的強(qiáng)弱；

(4)建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：

單組分檢測(cè)：采用表面等離子共振譜傳感器測(cè)量，通入50-100μL步驟(2)得到的混合液，記錄表面等離子體共振傳感器的響應(yīng)信號(hào)變化，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行多項(xiàng)式曲線擬合，獲得單組分回歸曲線的方程；再依次測(cè)得其它環(huán)境激素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及單組分回歸曲線的方程；

多組分同時(shí)檢測(cè)：采用表面等離子共振譜傳感器測(cè)量，將多種步驟(2)制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液與過(guò)量的抗體或包被原混合孵化，取孵化后的混合液50-100μL，通入傳感器，記錄下表面等離子體共振傳感器總體的響應(yīng)信號(hào)變化；然后按照步驟(3)的測(cè)試結(jié)果，依再生液洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序依次進(jìn)樣洗脫，記錄每次殘留抗體或包被原的響應(yīng)值變化；根據(jù)不同濃度孵化后的混合液及其相應(yīng)再生后殘留抗體或包被原的響應(yīng)信號(hào)值繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行多項(xiàng)式曲線擬合，獲得多組分回歸曲線方程；

(5)定量檢測(cè)：對(duì)于未知含量的含多種環(huán)境激素的未知樣品進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，向所述未知樣品的待測(cè)液中分別加入過(guò)量的抗體或包被原，混合孵化后進(jìn)樣，記錄總體的響應(yīng)值變化；按照再生液洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序依次進(jìn)樣洗脫，記錄芯片表面每次殘留抗體或包被原的響應(yīng)值變化；將殘留抗體或包被原的響應(yīng)值代入步驟(4)得到的多組分檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線以及相應(yīng)的單組分檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算各環(huán)境激素的濃度值；依次類推，實(shí)現(xiàn)對(duì)于環(huán)境激素的定量檢測(cè)；

(6)通入0.01-0.02mol/L、pH為1.2-2.5的甘氨酸-鹽酸緩沖溶液使芯片再生，再生后的芯片用于下次測(cè)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中，所述的pH值為7.4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟(5)中，標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備液與過(guò)量抗體或包被原的混合孵化時(shí)間為5-10分鐘。