[發明專利]一種抗枯萎病生物有機肥及其制備方法

在審

• 申請號: 201710087215.5
• 申請日: 2017-02-17
• 公開（公告）號: CN106748300A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 胡偉
• 申請（專利權）人: 湖南科技大學
• 主分類號: C05G3/00
• 分類號: C05G3/00;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 北京國昊天誠知識產權代理有限公司11315
• 代理人: 許志勇

技術領域

本申請屬于生物肥料領域，具體地說，涉及一種抗枯萎病生物有機肥及其制備方法。

背景技術

生物防治是利用有益生物或其他生物來抑制或消滅有害生物的一種防治方法。區別于傳統的農藥防治植物病害的模式，生物防治的主體是從病區土壤和健康植株中分離病原菌拮抗微生物及其代謝產物，包括真菌、細菌、病毒和能分泌抗生物質的抗生菌，這類微生物常對人體和生態環境無害。因此，利用微生物及其代謝產物制備的生防菌劑代替化學藥劑對植株病害進行防治已經成為了己成為世界范圍內的發展方向。

土壤或植株中活性菌株數量的多少是生防菌劑有效防治植物病害的關鍵。因此在農業生產上要體現生防菌劑的效果就必須確保施入土壤的菌種能穩定存活并且大量繁殖。土壤是一個復雜的生態體系，存在多種能夠影響微生物生存繁殖的環境因子，外來菌種很難快速適應各種復雜的土壤生態體系，特別是土壤中原有的土著微生物在與外來菌種的競爭中具有先天的優勢，使外來菌種受到排斥或抑制。因此，改變生防微生物的應用方式，提高其在復雜生態體系中的生存能力，對保障生物防治效果有著積極的現實意義。

微生物固定化技術是生物工程中的一項新興技術，通過化學或物理的方法將游離的微生物加以固定，使之成為具有高生物活性的固定化生長體，而且在適宜的條件下被固定的微生物還可以增殖，是一項能夠被重復和連續使用的生物工程技術。固定化微生物制備的方法大致可分為四種:吸附法、包埋法、共價結合法、交聯法。吸附法是將微生物細胞通過自然附著力吸附在載體表面，該法操作簡單、條件溫和、對細胞活性的影響小，但結合不牢固，細胞易脫落。包埋法是將微生物菌體包埋在半透性的聚合物凝膠或膜內，或使微生物細胞擴散進入多孔性的載體內部，常用的包埋材料包括聚乙烯醇，海藻酸鈉等。目前這些方法主要應用于醫藥、食品和發酵工業以及廢水處理等方面。早在上世紀90年代國外已開始采用固定化細胞技術制作微生物接種劑接種土壤，研究表明這種固定化接種劑用于土壤的效果非常明顯，呈現出良好的應用前景用海藻酸鈉包埋生防木霉菌株ThzID1-M3制備顆粒狀生防菌劑，在土壤中可獲得較高的定殖量。在國內，胡小加等(胡小加,江木蘭,張銀波.固定化植物促生菌的存活性研究[J].中國油料作物學報,2004,26(03):54-56.)運用此方法完成了對芽孢桿菌類的植物促生和生防微生物固定，結果表明，固定后的菌株能長期在土壤中有效定殖，并對作物土傳病害表現出一定的抑制作用，但該方法僅僅將抗病菌株作為單一微生物菌劑使用，這就容易導致菌株進入土壤環境后因缺乏適宜的生長環境和必要的養分來源，定殖數量在達到峰值后會快速衰退并失去抑制土傳病害的效用。

發明內容

有鑒于此，本申請針對上述的問題，提供了一種抗枯萎病生物有機肥及其制備方法，本發明中的微生物菌劑在施入土壤前已經與載體有機肥共同適應了至少6個月的時間，在共同適應期間，活性菌株數量始終保持較高含量。施入土壤后活性菌株既可以以載體有機肥作為養分來源，也可以與載體有機肥共同形成局部優勢土壤環境，確保菌株活性的同時為植物生長提供全面的有機養分和礦質養分。

為了解決上述技術問題，本申請公開了一種抗枯萎病生物有機肥，按照質量份包括以下組分：有機肥50-150份和含菌沸石粉1份。

進一步地，有機肥為非動物源原料發酵有機肥，所述非動物源原料發酵有機肥總無機養分不高于6％，有機質大于30％，pH為5.0-8.5，水分小于等于30％。

進一步地，含菌沸石粉通過以下方法制備得到：將沸石粉碎并過100目篩，150-200℃干熱滅菌20-60min后冷卻，將滅菌后的沸石與AF11b菌液按照質量體積比(g/mL)為1:10-2:1的比例放入攪拌機內進行混合，攪拌速度為30-90轉/min，混合時間為20-40min，靜置6-18h后去除上清液，將沉淀取出烘干，烘干溫度為40-80℃，時間為4-12h，烘干后的沸石進行粉碎，制備成含菌沸石粉。

進一步地，AF11b菌株菌液通過以下方法制備得到：選擇利福平作為菌株AF11的標記抗生素，挑選在100μg/mL濃度水平下具備拮抗效果的突變菌株作為抗性標記菌株，定名為AF11b；將菌株AF11b放置于32℃培養箱24h活化，將活化好的菌株放入10L-50L-500L三級自動發酵罐中進行擴繁，培養基采用細菌培養基；擴繁中溫度控制在30-35℃之間，當菌液OD₆₀₀值大于等于0.9時，發酵終止；制備得到菌株AF11b菌液，其中，細菌培養基具體為：每L培養基中含蛋白胨10g、酵母提取物5g和氯化鈉10g。