[發明專利]一種條件性過表達AQP4轉基因小鼠的模型制作方法

在審

• 申請號: 201710086794.1
• 申請日: 2017-02-17
• 公開（公告）號: CN106893740A
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發明（設計）人: 肖明;王臨梅;馮維熙
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/12;A01K67/027
• 代理公司: 南京睿之博知識產權代理有限公司32296
• 代理人: 陳琛

1.一種條件性過表達AQP4轉基因小鼠的模型制作方法，其特征在于該制作方法包括以下步驟：

第1步：hGFAP-mAQP4轉基因載體構建；

第2步：轉基因載體原核顯微注射；

第3步；品系基因鑒定，最終建立小鼠基因組中帶有外源AQP4基因的遺傳性小鼠突變模型。

2.根據權利要求1所述的一種條件性過表達AQP4轉基因小鼠的模型制作方法，其特征在于第1步所述的轉基因載體的構建方法是:合成5'UTR-Aqp4CDS-3'untranslated and polyA sequence，連接到四環素依賴誘導表達載體pTRE3G，然后將以上序列片段酶切下來連接到絕緣子載體pInsulator，合成人源膠質纖維酸性蛋白GFAP啟動子序列，與增強子CMV融合后連接到四環素依賴誘導表達載體-多聚腺嘌呤核糖核苷酸結尾序列表達載體rtTA3G-polyA上，再將片段酶切下來，連接到上一步構建好的載體中，完成整個載體的構建。

3.根據權利要求1所述的一種條件性過表達AQP4轉基因小鼠的模型制作方法，其特征在于第2步所述的轉基因載體原核顯微注射是：將外源線性轉基因載體注射到C57BL/6小鼠受精卵細胞核內；外源性基因會隨機插入到小鼠基因組中，最終構建的hGFAP-mAQP4轉基因小鼠能夠在攝入強力霉素后過表達AQP4蛋白，便于進行后續的蛋白印跡實驗。

4.根據權利要求1所述的一種條件性過表達AQP4轉基因小鼠的模型制作方法，其特征在于第3步所述的基因鑒定是：出生的首代hGFAP-mAQP4轉基因陽性的小鼠即為首建鼠；每只首建鼠都將被視為一個獨立的品系進行繁育，對每只首建鼠品系都進行剪尾基因鑒定。