[發(fā)明專利]一種血清葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710086306.7
• 申請日: 2017-02-17
• 公開（公告）號(hào): CN106908291A
• 公開（公告）日: 2017-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李海龍;程貝;蔣哲;孟凡國
• 申請（專利權(quán)）人: 嘉興博泰生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司33101
• 代理人: 翁霽明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種以人血清為基質(zhì)的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，具體說是涉及一種血清葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法。

背景技術(shù)

我國糖尿病患病率呈迅速增加趨勢，由糖尿病導(dǎo)致的微血管并發(fā)癥(視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、神經(jīng)病變和糖尿病足)及大血管并發(fā)癥(心、腦血管疾病)的發(fā)生率、致殘率和致死率極高，嚴(yán)重威脅糖尿病患者的生存質(zhì)量甚至生命，也給醫(yī)療資源和社會(huì)經(jīng)濟(jì)造成巨大的負(fù)擔(dān)，因此，臨床準(zhǔn)確測定血清中葡萄糖的濃度，是糖尿病的早期診斷以及糖尿病患者血糖水平合理控制是關(guān)鍵所在。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于校準(zhǔn)測量系統(tǒng)、評(píng)價(jià)測量程序或?yàn)椴牧腺x值。隨著臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)化學(xué)標(biāo)本檢測量的增加，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的需要量也相應(yīng)大量增加。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備途徑主要有：人工合成、自然界物質(zhì)提純、人或動(dòng)物組織來源提純品或者基因工程重組標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。作為質(zhì)控物質(zhì)，最好選用天然的物質(zhì)，與待測標(biāo)本具有盡可能的相似性，否則將不具有充分的代表性。因此研制臨床檢驗(yàn)用的人血清質(zhì)冰凍混合血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)勢在必行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，而提供一種有良好均勻性、穩(wěn)定性及互通性，符合《一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范》及ISO Guide35的要求，采用新鮮血液制備，來源廣泛，制備方法簡單的血清葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種血清葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，其特征在于該制備方法包括以下步驟：

(1)血清的制備：起始原料來源健康捐助者血液，每個(gè)捐助者抽取全血后，得到血清量為110-170毫升；

(2)血清的處理：將各捐助者的血清混合，添加純葡萄糖物質(zhì)至目標(biāo)濃度5-7mmol/L，離心以實(shí)現(xiàn)均一、澄清的“候選血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”；

所述的“候選血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”經(jīng)無菌過濾后分裝于經(jīng)滅菌干燥的棕色安培瓶中，每瓶1毫升，-70℃冰凍儲(chǔ)存；得到互通性良好、均一穩(wěn)定、量值溯源可靠的、濃度水平為5-7mmol/L人血清基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

作為優(yōu)選：所述的健康捐助者選擇標(biāo)準(zhǔn)為年齡20-50歲、血脂水平適當(dāng)、人類免疫缺陷病毒抗體和乙型、丙型肝炎表面抗原陰性；每個(gè)捐助者抽取300-400毫升全血，平均得到血清量為140毫升。

作為優(yōu)選：所述的健康捐助者在餐前抽血，收集于干燥的、不含任何添加劑的離子瓶中，放置在室溫下凝血3-4小時(shí)，在2000～3000g下離心20分鐘，從血塊中分離出血清。

血清混合后測定葡萄糖初濃度，添加純葡萄糖物質(zhì)至目標(biāo)濃度，在6000～9000g下離心20分鐘，取上清液以盡量去除血清樣本中的凝血、纖維蛋白等成分，目測為清晰、淡黃色且無顆粒物質(zhì)，紫外分光光度儀在波長710nm、比色皿1厘米條件下吸光度A不超過0.5，若不符合則繼續(xù)在6000～9000g下離心20分鐘。

作為優(yōu)選：所述的添加純葡萄糖物質(zhì)為編號(hào)GBW10062的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；葡萄糖濃度的定值方法為氣相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜法。

作為優(yōu)選：所述“候選血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”在生物安全柜中進(jìn)行負(fù)壓抽吸過濾，血清依次經(jīng)過0.45、0.22μm等親水膜進(jìn)行無菌過濾。

本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)存在如下技術(shù)效果：該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有良好的均勻性、穩(wěn)定性及互通性，符合《一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范》及ISO Guide35的要求；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用新鮮血液制備，來源廣泛，制備簡單，使用方便；在-70℃可長期儲(chǔ)存，對(duì)于常規(guī)檢測系統(tǒng)的溯源和質(zhì)量評(píng)價(jià)以及協(xié)作研究分析中的質(zhì)量保證都可發(fā)揮作用，具有很大的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。

本發(fā)明所述的一種血清葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，該制備方法包括以下步驟：

(1)血清的制備：起始原料來源健康捐助者血液，每個(gè)捐助者抽取全血后，得到血清量為110-170毫升；

(2)血清的處理：將各捐助者的血清混合，添加純葡萄糖物質(zhì)至目標(biāo)濃度5-7mmol/L，離心以實(shí)現(xiàn)均一、澄清的“候選血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”；

所述的“候選血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”經(jīng)無菌過濾后分裝于經(jīng)滅菌干燥的棕色安培瓶中，每瓶1毫升，-70℃冰凍儲(chǔ)存；得到互通性良好、均一穩(wěn)定、量值溯源可靠的、濃度水平為5-7mmol/L人血清基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

本發(fā)明所述的健康捐助者選擇標(biāo)準(zhǔn)為年齡20-50歲、血脂水平適當(dāng)、人類免疫缺陷病毒抗體和乙型、丙型肝炎表面抗原陰性；每個(gè)捐助者抽取300-400毫升全血，平均得到血清量為140毫升。