[發明專利]一種腺病毒高免卵黃抗體注射液及其制備方法

在審

• 申請號: 201710084395.1
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106806891A
• 公開（公告）日: 2017-06-09
• 發明（設計）人: 鄭培培;羅青平;邵華斌;王紅琳;溫國元;張蓉蓉;張騰飛;汪宏才;盧琴;羅玲
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61P31/14;C07K16/08;C07K16/02
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

1.一種腺病毒高免卵黃抗體注射液，其特征在于，雞卵黃中含有水分48％，蛋白質17.8％和脂肪30.5％，其他3.7％。

2.一種權利要求1所述的腺病毒高免卵黃抗體注射液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、分離毒株制備疫苗：樣品經過研磨，凍融3次，12000g/min告訴離心8min，吸取上清液，將上清液接種到雞胚尿囊腔，經過3代的傳遞，根據雞胚的病變和PCR檢測情況，驗證得到弱毒株XH03；

步驟2、免疫健康雞群制得蛋：采用自備的雞腺病毒滅活苗對健康21只進行免疫，免疫兩次，間隔兩周，一周后開始收集蛋，清理、消毒、晾干備用；

步驟3、將收集好的雞蛋表面污物洗干凈，在0.4％的新潔爾滅溶液中浸泡15min；取出后用消毒紗布擦干，從小頭打破蛋殼后倒盡蛋清；用不帶針頭的1ml無菌注射器插入蛋黃中，吸取500ul放入高壓滅菌過的2ml離心管內，加入1ml PBS緩沖液，即卵黃：PBS以1:2的比例稀釋；在卵黃液中加入青、鏈霉素各1000單位/ml；按0.01％加入硫柳汞，以防止微生物污染；在漩渦混勻器上充分混合均勻，并用封口膜封口，放置4℃備用；

步驟4、高免卵黃抗體的提取

1)用PBS稀釋卵黃液，體積比為2:1，用PEG-6000配成3.5％的PEG溶液，混合均勻，靜置20min，4℃，14000rpm離心10min；

2)棄去上清液和脂肪層；添加PEG-6000，配成12％的PEG溶液，混合均勻，靜置20min；4℃，14000rpm離心10min；

3)棄去上清液，用PBS稀釋沉淀至原卵黃液體積；然后添加PEG-6000，配成12％(w/v)的PEG溶液，混合均勻，靜置20min；4℃，14000rpm離心10min；

4)棄去上清液，PEG用抽氣法移走，然后用PBS溶解沉淀至體積為原卵黃溶液的二分之一。