[發明專利]一種用于核酸純化或片段篩選的試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201710084118.0
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106893721B
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 崔曉鋒
• 申請（專利權）人: 廣東一氪生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 陳亞男;郝傳鑫

本發明公開了一種用于核酸純化或片段篩選的試劑盒，其包括磁珠溶液、洗滌試劑和洗脫試劑；其中，所述磁珠溶液包含濃度為1～100ng/μL的氧化硅羧基磁珠、濃度為0.1～100mol/L的氯化鈉、體積百分比濃度為1％～50％的聚乙二醇和緩沖液。本發明還公開了使用所述試劑盒進行核酸純化和片段篩選的方法。本發明的試劑盒用磁珠法進行核酸純化與片段篩選操作，不受通量限制，可以實現高通量，同時本發明基于磁珠的磁性特性，可配合自動化操作儀器進行自動化操作。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種用于核酸純化或片段篩選的試劑盒及其使用方法。

背景技術

高通量測序技術，即下一代測序技術(next generation sequencing)能一次對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定及量化，為基礎生物醫學研究和臨床檢測提供了一個強大的工具，并推動基因組學的科學研究和臨床轉化，奠定了其在精準醫學的基石地位。而一個待檢樣品在走上高通量DNA測序機器測序前還需要做大量的工作，其中的關鍵步驟就是文庫構建。文庫構建包括核酸片段化、修復反應、加A反應、連接反應、片段篩選與純化、PCR擴增、PCR產物純化、文庫質檢等過程，這些過程需要做大量的核酸純化及片段篩選的工作。

目前核酸純化及片段篩選的方法有膠回收法、離心柱法等。膠回收法是根據凝膠電泳中不同片段大小的核酸在凝膠上的泳動距離不同而通過對含特定大小核酸片段的凝膠切割下來，再將切割下來的凝膠中的核酸分離純化出來，達到核酸片段選擇純化的目的。離心柱法是利用硅膠膜配合特定的溶液環境來吸附核酸片段而達到核酸片段選擇純化的目的。但這些方法存在操作繁瑣，耗時，或需要凝膠電泳或需要離心，無法實現高通量、自動化操作。膠回收法首先需要制備凝膠、電泳、切膠、回收等過程需要消耗大量的時間、花費不少人力操作成本。離心柱法一般需要吸附、洗滌、洗脫等步驟，其間需要大量的離心操作步驟，每次離心5min左右，而離心機的通量有限，限制了操作的簡便性，當然少量樣品以上兩種方法可以是種選擇，但當需要實現批量操作的時候，以上方法無法滿足。

發明內容

一方面，本發明的目的在于克服現有技術存在的不足之處而提供了一種用于核酸純化或片段篩選的試劑盒，本發明的試劑盒用磁珠法進行核酸純化與片段篩選操作，不受通量限制，可以實現高通量，同時本發明基于磁珠的磁性特性，可配合自動化操作儀器進行自動化操作。

本發明采用的技術方案為：一種用于核酸純化或片段篩選的試劑盒，包括磁珠溶液、洗滌試劑和洗脫試劑；其中，所述磁珠溶液包含濃度為1～100ng/μL的氧化硅羧基磁珠、0.1～100mol/L的氯化鈉、體積百分比濃度為1％～50％的聚乙二醇和緩沖液。

作為對上述技術方案的進一步改進，所述緩沖液為pH為5.5～6.5的1～100mol/L三羥基甲烷-鹽酸。所述PH優選為6.0。

作為對上述技術方案的進一步改進，所述聚乙二醇的分子量為5000～10000道爾頓，優選為8000道爾頓。PEG最早應用于提純免疫球蛋白(IgG)和沉淀一些細菌病毒，近年來逐漸應用于核酸和酶的分離純化，特別是用PEG分離質粒DNA，已相當普遍。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA，可以在500ul DNA液中加入200ul 20％PEG8000(含1.2mol/LNaCl)，冰浴20min。該操作的優點在于：操作條件溫和，不易引起生物大分子的變性。同時具有極高的沉淀效能，少量的PEG可以沉淀相當多的生物大分子。

作為對上述技術方案的進一步改進，所述氧化硅羧基磁珠的濃度為5～50ng/μL，所述氯化鈉的濃度為0.5～10mol/L，所述聚乙二醇的體積百分比濃度為2％～30％。各組分在以上濃度范圍內時，試劑盒的使用效果更佳，對鹽、引物、引物二聚體、dNTPs、小片段的DNA分子等去除效率更高，對目標片段的回收率更高。