[發明專利]一種用于核酸純化或片段篩選的試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201710084118.0
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106893721B
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 崔曉鋒
• 申請（專利權）人: 廣東一氪生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 陳亞男;郝傳鑫

1.一種用于核酸純化或片段篩選的試劑盒，其特征在于：包括磁珠溶液、洗滌試劑和洗脫試劑；其中，所述磁珠溶液由濃度為10ng/μL的氧化硅羧基磁珠、濃度為2.5mol/L的氯化鈉，體積百分比濃度為12％的PEG8000，1mol/L且pH值為6.0的三羥基甲烷-鹽酸組成；所述洗滌試劑由體積百分比濃度為70％的乙醇，100mmol/L氯化鈉，10mmol/L乙二胺四乙酸，10mmol/L且pH值為8.0的三羥基甲烷-鹽酸組成；所述洗脫試劑為10mmol/L且pH值為8.5的三羥基甲烷-鹽酸。

2.使用權利要求1所述的試劑盒進行核酸純化的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)向盛有待純化核酸樣品的反應管中加入所述磁珠溶液，混勻，室溫下靜置3～10min；

2)將所述反應管置于磁力架，靜置2～5min，待溶液澄清后，吸走上清液；

3)向所述反應管中加入所述洗滌試劑，室溫靜置20～60s，吸走上清液；此步驟至少進行一次；

4)保持所述反應管置于磁力架上狀態，室溫開蓋晾干2～5min；

5)將所述反應管從磁力架上取下來，加入洗脫試劑，混勻，室溫靜置2～6min；

6)將所述反應管重新放置在磁力架上，室溫靜置1～3min，上清液即純化后的DNA產物。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中，磁珠溶液的加入體積為待純化核酸樣品體積的0.5～2倍。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中，磁珠溶液的加入體積為待純化核酸樣品體積的1.8倍。

5.使用權利要求1所述的試劑盒進行片段篩選的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1＇)將第一輪磁珠溶液加入盛有待篩選核酸樣品的反應管中，混勻，室溫下靜置3～10min；

2＇)將所述反應管放置在磁力架上，靜置2～5min，待溶液澄清后將上清液轉移置新的反應管；

3＇)向上述裝有上清液的反應管加入第二輪磁珠溶液，室溫靜置3～10min，置于磁力架上，靜置2～5min，待溶液澄清后吸走上清液；所述第一輪磁珠溶液與第二輪磁珠溶液的總和即為所述磁珠溶液；

4＇)向反應管中加入洗滌試劑，室溫靜置20～60s，吸走上清液；此步驟至少進行一次；

5＇)保持反應管置于磁力架上狀態，室溫開蓋晾干2～5min；

6＇)將反應管從磁力架上取下來，加入洗脫試劑，混勻，室溫靜置2～6min；

7＇)將反應管重新放置在磁力架上，室溫靜置1～3min，上清液即篩選的核酸片段。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述第一輪磁珠溶液的加入量為待篩選核酸樣品體積的0.4～0.8倍，所述第二輪磁珠溶液的加入量為待篩選核酸樣品體積的0.1～0.3倍，所述篩選的核酸片段的平均長度為250～700bp。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述第一輪磁珠溶液的加入量、第二輪磁珠溶液的加入量與對應的篩選的核酸片段的平均長度如下表所示：

表中”ד表示待篩選核酸樣品的體積。

8.如權利要求1所述的試劑盒用于核酸純化和片段篩選。