[發明專利]適用于家蠶細胞雙熒光素酶報告基因系統的內參質粒及其制備方法和應用無效
| 申請號： | 201710084001.2 | 申請日： | 2017-02-16 |
| 公開（公告）號： | CN106701766A | 公開（公告）日： | 2017-05-24 |
| 發明（設計）人： | 夏慶友;劉紅玲;林英;沈關望 | 申請（專利權）人： | 西南大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/65;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京同恒源知識產權代理有限公司11275 | 代理人： | 趙榮之 |
| 地址： | 400715*** | 國省代碼： | 重慶;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 適用于 家蠶 細胞 熒光 報告 基因 系統 內參 質粒 及其 制備 方法 應用 | ||
【權利要求書】：
1.適用于家蠶細胞雙熒光素酶報告基因系統的組成型啟動子BmVgP78M，其特征在于：所述組成型啟動子BmVgP78M的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
2.含有權利要求1所述組成型啟動子BmVgP78M的內參質粒。
3.根據權利要求2所述的內參質粒，其特征在于：所述內參質粒由BmVgP78M啟動子連入PRL-SV40質粒BglⅡ和NheI限制性內切酶而得。
4.權利要求2或3所述內參質粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：以SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6為引物，含有SEQ ID NO.4所示序列的載體為模板進行PCR擴增，然后將擴增產物用BglⅡ和NheI酶切后連入經同樣酶切的PRL-SV40質粒。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述PCR擴增的條件為94℃預變性4分鐘；94℃變性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸10秒，共30個循環；最后72℃延伸10分鐘，4℃保存。
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述含有SEQ ID NO.4所示序列的載體由以下方法制得：以家蠶品種大造成蟲基因組為模板，SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示序列為引物進行PCR擴增，然后將擴增產物連入pMD-19T simple載體即可。
7.權利要求2或3所述內參質粒在制備家蠶雙熒光素酶報告基因系統中的應用。
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