[發明專利]一種經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑

在審

• 申請號: 201710083760.7
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106924286A
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 趙雄飛;鄭佳威;黃倩瑩
• 申請（專利權）人: 上海安集協康生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K35/30
• 分類號: A61K35/30;A61K9/00;C12N5/0797;A61P25/16
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司31227
• 代理人: 曹莉

1.一種經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

S1：種子細胞培養與純化：將原代神經干細胞用無血清培養基對細胞懸液進行培養擴增傳代至P5代即為獲得的種子細胞；

S2：P6—P8代細胞培養：將步驟S1中得到的P5代神經干細胞用無血清培養基對細胞懸液進行培養擴增傳代至P8代；

S3：工作細胞庫：取步驟S2中P8代細胞，進行細胞特性和異源物質檢測，檢測合格后，即為工作細胞，將其進行消化凍存，并轉移至工作細胞庫待用；

S4：用于帕金森病的治療制劑的配制：將步驟S3的工作細胞進行貼壁培養，待細胞生長至對數生長期時將細胞進行消化并計數；然后在0-4度條件下將工作細胞溶液與塑形劑按體積比1：1進行混合；所述工作細胞溶液的濃度為100微升2.5x10⁶個工作細胞；所述塑性劑為Matrigel與0.4％羧甲基纖維素鈉溶液按體積比1:1進行混合。

2.如權利要求1所述的經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述原代神經干細胞來自靈長類動物或嚙齒類動物。

3.如權利要求1所述的經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述原代神經干細胞來自神經球凍存液或神經干細胞細胞系，間充質干細胞向神經方向誘導獲得的神經干細胞、由其他來源經誘導分化而來的神經干細胞、除神經組織器官以外的其他器官及組織而來的神經干細胞中的一種或幾種。

4.如權利要求1所述的經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述培養擴增傳代的方法為將P5代神經干細胞消化計數后，采用無血清完全培養基進行重懸，并調整密度為1x10⁵個/ml，接種，置于35℃5％CO2環境進行貼壁培養；細胞培養每間隔48小時進行換液，細胞連續培養7天左右即可傳代，直至P8代。

5.如權利要求1所述的經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑的制備方法，其特征在于，步驟S1和S2中所述無血清培養基是由DMEM/F12，B27，N2，以及神經營養因子BFGF,EGF,LIF組成，無任何動物源血清成分。

6.根據權利要求1-5中所述的任何一種制備方法制備的經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑。

7.權利要求6中所述的經鼻腔給藥用于帕金森病治療的神經干細胞制劑的使用方法，其特征在于，將所述的用于帕金森病的治療制劑取出，滴至鼻腔粘膜或注射至皮下。