[發明專利]一種ACPA陰性的RA診斷標志物及其應用

有效

• 申請號: 201710081532.6
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN106950366B
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 張烜;莫文秀;李永哲;胡朝軍;劉國振;武麗君
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院;北京衡定聯合生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/564
• 分類號: G01N33/564;G01N33/68
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種ACPA陰性的RA診斷標志物及其應用。

背景技術

類風濕性關節炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性的自身免疫性疾病，主要是以引起全身多處小關節局部滑膜的炎癥反應，進而造成關節局部的骨質破壞為一組臨床表現的疾病。在發展中國家，類風濕性關節炎影響了近0.5％-1％左右的人群。總體來說，RA在女性中的發病率要高于男性，在老年人中的發病率要高于年輕人。類風濕性關節炎的臨床表現差異很大，可以是輕微癥狀的自限性疾病，也可以是快速進展的炎癥伴關節破壞及嚴重身體殘疾。由于疾病表現的差異性，人們制定了分類標準作為疾病定義、標準化臨床試驗入選人群選擇以及多中心研究比較的基礎。因此1987誕生了由年美國風濕病學會(ACR)制定的RA的分類標準。但在實際應用過程中，由于該分類標準對于關節炎的定義要求嚴格，致使它對于RA診斷的敏感性不高，有相當一部分早期的RA并沒有從中被識別出來。但同時，尤為重要的是新發RA病例有可能從早期的有效干預中獲益，以避免進展為慢性、侵蝕狀態RA，進一步導致殘疾，影響長期生活質量，增加疾病死亡率。因此，對于類風濕性關節炎來說，早期的診斷和治療是阻止不可逆性關節破壞的關鍵。于是2009年，ACR/EULAR標準更新，該標準診斷RA的敏感性較高，能夠在疾病早期診斷RA并進行治療，缺點是特異性較差。

在2009年最新的RA的分類標準中，血清中ACPA(抗瓜氨酸多肽抗體)的陽性被納入診斷標準。這一抗瓜氨酸化的蛋白抗體被認為是類風濕性關節炎的血清特異性的標志物，它的出現也增加了我們對RA發病機制的理解。但是直至現在，RA的確切病因仍然未知，環境因素和遺傳因素被公認為是引起RA臨床癥狀的“扳機”。同時，臨床上也存在著一類ACPA抗體陰性的RA患者，并且隨著研究者對疾病的認識不斷加深，他們逐漸認識到ACPA抗體陽性的RA患者和ACPA抗體陰性的RA患者存在一定的臨床異質性。但是由于目前臨床上對于ACPA抗體陰性的RA患者缺乏特異性的生物標志物，這使得這類患者的診斷難度大大增加。

RA患者的血清中發現自身抗體已經超過70年。類風濕因子以人類IgG的Fc片段為靶點，是發現的第一組自身抗體，包括IgG和IgM等各類亞型。遺憾的是RF并不是針對RA的特異性抗體，在其他自身免疫病和高齡人群中也會有RF的出現。更重要的是，在高達15％的健康人群中也可以檢測到RF。隨著研究的深入，1964年和1979年，人們分別發現了RA患者中存在的其它抗體，即抗核周因子抗體(APF)和抗角蛋白抗體(AKA)。盡管這兩種抗體對診斷RA的特異性很高，但這些自身抗體很難測到。因此，在日常實踐中，RF仍被輔助用于RA的診斷。為此，RF陽性被納入1987年ACR的RA標準。直到1995年人們才發現抗核周蛋白和抗角蛋白抗體是相同的自身抗體，它們共同的靶點都來自精氨酸殘基的去亞胺化所形成的的瓜氨酸殘基。于是，2002年通過研發瓜氨酸化肽(CCP)-2技術出現了首個測定ACPA的商業化測試，使ACPA能夠作為RA常規檢查的生物標志物。對這個獨特的自身抗體系統進行深入研究，加深了人們對RA的理解和分類，因此，RF和ACPA都成為ACR/EULAR2010分類標準的一部分。

最近，有文獻報道了RA患者血清識別氨基甲酰化蛋白(抗CarP)的新的自身抗體亞型。這個抗體系統獨立于ACPA，因為RA患者的血清抗體能夠區分瓜氨酸化和氨基甲酰化抗原。相應的，有相當部分ACPA陰性患者存在抗CarP抗體。在過去的數年，由于RA特異性針對瓜氨酸化蛋白和氨基甲酰化蛋白自身抗體的發現，人們對RA的發病及病因學有了深入的認識。氨基甲酰化和瓜氨酸化都是翻譯后修飾，分別引起蛋白氨基甲酰化和瓜氨酸化，使帶正電荷的氨基酸為中性氨基酸所替代。瓜氨酸化蛋白由PAD酶產生，而氨基甲酰化蛋白是氨基酸賴氨酸通過化學反應轉化為高瓜氨酸。瓜氨酸和高瓜氨酸在化學結構上相似，但位于蛋白質的不同位點，因為精氨酸和賴氨酸在不同的部位。而且，高瓜氨酸只是多了一個甲酰基。盡管一些抗體對兩種結構都有反應性，但有些抗CarP抗體對瓜氨酸不產生反應，同樣，一些抗瓜氨酸抗體也對CarP不產生反應。