[發明專利]同時檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑及試劑盒

在審

• 申請號: 201710079427.9
• 申請日: 2017-02-14
• 公開（公告）號: CN106868206A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 李泓彥;詹馨恵;姚飛平;楊彪
• 申請（專利權）人: 深圳市艾偉迪生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司44224
• 代理人: 徐春祺

技術領域

本發明涉及診斷技術領域，特別是涉及一種同時檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑及試劑盒。

背景技術

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，引發手足口病的腸道病毒有20多種(型)，其中以EV71型腸道病毒(EV71)和A16型柯薩奇病毒(Cox A16，CA16)最為常見。但隨著流行趨勢的變化，有數據表明在2014年到2015年廣東省爆發的手足口病中，A6型的柯薩奇病毒(Cox A6，CA6)已經取代了A16型的柯薩奇病毒(Cox A16，CA16)，成為了柯薩奇病毒最為常見的病原體。近年來我國北京市、上海市、廣東省、福建省、臺灣省等地均有規模爆發EV71型腸道病毒和A6型的柯薩奇病毒引起的手足口病，所以這兩種腸道病毒的早期檢測十分重要。

然而，目前暫未報道有同時檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑及試劑盒。

發明內容

基于此，有必要提供一種檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑及試劑盒。

一種同時檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，包括：

用于擴增EV71型腸道病毒的上游引物EV71F1，所述上游引物EV71F1的序列為SEQ ID No.1所示的序列；

用于擴增EV71型腸道病毒的下游引物EV71R1，所述下游引物EV71R1的序列為SEQ ID No.2所示的序列；

用于檢測EV71型腸道病毒的探針EV71P1，所述探針EV71P1的兩端分別結合有第一熒光報告基團和第一熒光淬滅基團；

用于擴增A6型柯薩奇病毒的上游引物CA6F2，所述上游引物CA6F2的序列為SEQ ID No.3所示的序列；

用于擴增A6型柯薩奇病毒的下游引物CA6R2，所述下游引物CA6R2的序列為SEQ ID No.4所示的序列；以及

用于檢測A6型柯薩奇病毒的探針CA6P2，所述探針CA6P2的兩端分別結合有第二熒光報告基團和第二熒光淬滅基團，所述第一熒光報告基團與所述第二熒光報告基團不同。

在一個實施方式中，所述探針EV71P1的序列為SEQ ID No.5所示的序列。

在一個實施方式中，所述探針CA6P2的序列為SEQ ID No.6所示的序列。

在一個實施方式中，所述第一熒光報告基團和所述第二熒光報告基團均選自FAM熒光基團、ROX熒光基團、VIC熒光基團、JOE熒光基團、TET熒光基團、CY3熒光基團、CY5熒光基團、Texas Red熒光基團和LC RED640熒光基團中的一種；所述第一熒光淬滅基團和所述第二熒光淬滅基團均選自BHQ1淬滅基團、BHQ2淬滅基團、BHQ3淬滅基團、Dabcy1淬滅基團和Tamra淬滅基團中的一種。

在一個實施方式中，所述探針EV71P1的5’端結合有第一熒光報告基團，所述探針EV71P1的3’端結合有第一熒光淬滅基團，所述第一熒光報告基團為FAM熒光基團，所述第一熒光淬滅基團為BHQ1淬滅基團。

在一個實施方式中，所述探針CA6P2的5’端結合有第二熒光報告基團，所述探針CA6P2的3’端結合有第二熒光淬滅基團，所述第二熒光報告基團為VIC熒光基團，所述第二熒光淬滅基團為BHQ1淬滅基團。

在一個實施方式中，所述上游引物EV71F1、所述下游引物EV71R1、所述探針EV71P1的摩爾比為1:1:1，所述上游引物CA6F2、所述下游引物CA6R2、所述探針CA6P2的摩爾比為3:3:2，所述探針EV71P1與所述探針CA6P2的摩爾比為1:1。

一種同時檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的試劑盒，包括上述的檢測試劑。

在一個實施方式中，還包括PCR反應液、酶混合液、陽性對照品以及陰性對照品。

在一個實施方式中，所述PCR反應液包括終濃度為20mmol/L～30mmol/L的MgCl₂和終濃度為5mmol/L～15mmol/L的dNTPs；所述酶混合液包括熱啟動Taq酶和MMLV逆轉錄酶；所述陽性對照品為滅活的EV71型腸道病毒及A6型柯薩奇病毒的病毒培養液；所述陰性對照品為去RNA酶的無菌水。