[發(fā)明專利]同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710079427.9
• 申請日: 2017-02-14
• 公開（公告）號: CN106868206A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李泓彥;詹馨恵;姚飛平;楊彪
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市艾偉迪生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司44224
• 代理人: 徐春祺

1.一種同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，其特征在于，包括：

用于擴(kuò)增EV71型腸道病毒的上游引物EV71F1，所述上游引物EV71F1的序列為SEQ ID No.1所示的序列；

用于擴(kuò)增EV71型腸道病毒的下游引物EV71R1，所述下游引物EV71R1的序列為SEQ ID No.2所示的序列；

用于檢測EV71型腸道病毒的探針EV71P1，所述探針EV71P1的兩端分別結(jié)合有第一熒光報(bào)告基團(tuán)和第一熒光淬滅基團(tuán)；

用于擴(kuò)增A6型柯薩奇病毒的上游引物CA6F2，所述上游引物CA6F2的序列為SEQ ID No.3所示的序列；

用于擴(kuò)增A6型柯薩奇病毒的下游引物CA6R2，所述下游引物CA6R2的序列為SEQ ID No.4所示的序列；以及

用于檢測A6型柯薩奇病毒的探針CA6P2，所述探針CA6P2的兩端分別結(jié)合有第二熒光報(bào)告基團(tuán)和第二熒光淬滅基團(tuán)，所述第一熒光報(bào)告基團(tuán)與所述第二熒光報(bào)告基團(tuán)不同。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，其特征在于，所述探針EV71P1的序列為SEQ ID No.5所示的序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，其特征在于，所述探針CA6P2的序列為SEQ ID No.6所示的序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，其特征在于，所述第一熒光報(bào)告基團(tuán)和所述第二熒光報(bào)告基團(tuán)均選自FAM熒光基團(tuán)、ROX熒光基團(tuán)、VIC熒光基團(tuán)、JOE熒光基團(tuán)、TET熒光基團(tuán)、CY3熒光基團(tuán)、CY5熒光基團(tuán)、Texas Red熒光基團(tuán)和LC RED640熒光基團(tuán)中的一種；所述第一熒光淬滅基團(tuán)和所述第二熒光淬滅基團(tuán)均選自BHQ1淬滅基團(tuán)、BHQ2淬滅基團(tuán)、BHQ3淬滅基團(tuán)、Dabcy1淬滅基團(tuán)和Tamra淬滅基團(tuán)中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，其特征在于，所述探針EV71P1的5’端結(jié)合有第一熒光報(bào)告基團(tuán)，所述探針EV71P1的3’端結(jié)合有第一熒光淬滅基團(tuán)，所述第一熒光報(bào)告基團(tuán)為FAM熒光基團(tuán)，所述第一熒光淬滅基團(tuán)為BHQ1淬滅基團(tuán)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，其特征在于，所述探針CA6P2的5’端結(jié)合有第二熒光報(bào)告基團(tuán)，所述探針CA6P2的3’端結(jié)合有第二熒光淬滅基團(tuán)，所述第二熒光報(bào)告基團(tuán)為VIC熒光基團(tuán)，所述第二熒光淬滅基團(tuán)為BHQ1淬滅基團(tuán)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的檢測試劑，其特征在于，所述上游引物EV71F1、所述下游引物EV71R1、所述探針EV71P1的摩爾比為1:1:1，所述上游引物CA6F2、所述下游引物CA6R2、所述探針CA6P2的摩爾比為3:3:2，所述探針EV71P1與所述探針CA6P2的摩爾比為1:1。

8.一種同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的試劑盒，其特征在于，包括如權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述的檢測試劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的試劑盒，其特征在于，還包括PCR反應(yīng)液、酶混合液、陽性對照品以及陰性對照品。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的同時(shí)檢測EV71型腸道病毒和A6型柯薩奇病毒的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應(yīng)液包括終濃度為20mmol/L～30mmol/L的MgCl₂和終濃度為5mmol/L～15mmol/L的dNTPs；所述酶混合液包括熱啟動Taq酶和MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶；所述陽性對照品為滅活的EV71型腸道病毒及A6型柯薩奇病毒的病毒培養(yǎng)液；所述陰性對照品為去RNA酶的無菌水。