[發(fā)明專利]蛋白類藥物中唾液酸的檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710078881.2
• 申請日: 2017-02-14
• 公開（公告）號: CN106908528A
• 公開（公告）日: 2017-06-30
• 發(fā)明（設計）人: 邢偉博
• 申請（專利權(quán)）人: 信達生物制藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司31266
• 代理人: 崔佳佳,劉妍珺

1.一種對蛋白的唾液酸含量進行檢測的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)提供一待分析樣品，其中含有待分析蛋白；

(2)對步驟(1)中的樣品進行酸水解，得到酸水解產(chǎn)物；

(3)對(2)中所述的酸水解產(chǎn)物用標記試劑進行標記，獲得經(jīng)標記的混合物；

(4)用有機溶劑對所述經(jīng)標記的混合物進行色譜預處理，獲得預處理的混合物；

(5)將所述預處理的混合物上樣于親水相互作用色譜柱，進行色譜分離，獲得含標記的唾液酸的洗脫液；

(6)對所述的洗脫液進行檢測，從而獲得所述蛋白的唾液酸含量的測定結(jié)果。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述酸水解所用酸選自下組：乙酸、三氟乙酸、硫酸、鹽酸、甲酸、三氯乙酸、磷酸、硝酸。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待分析蛋白為抗體蛋白。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待分析蛋白為融合蛋白。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述標記試劑選自：4,5-亞甲二氧基-1,2-苯二胺二鹽酸鹽(DMB)，或具有式I結(jié)構(gòu)的標記化合物：

式中，

化合物1，X＝O，R＝CH₃；

化合物2，X＝O，

化合物3，X＝NH，R＝H；

化合物4，X＝NH，R＝CH₃；

化合物5，X＝NH，

化合物6，X＝NH，

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述有機溶劑選自下組：乙腈、甲醇、乙醇、DMSO、異丙醇、或其組合。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜柱為BEH amide柱。

8.如權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于，所述色譜分析的參數(shù)流速為0.1-0.8ml/min，較佳地為0.2-0.6ml/min，更佳地為0.4ml/min。

9.如權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于，所述色譜分析的流動相包含水相和有機溶劑。

10.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

(1)酸水解試劑；

(2)標記試劑；

(3)任選的標準品和/或標準曲線，所述標準品選自NGNA、NANA或其組合；和

(4)描述利用(1)所述酸水解試劑進行酸水解和利用(2)所述標記試劑進行唾液酸標記的使用說明書。