[發明專利]一種以胎盤為來源的造血干細胞提取及凍存方法

有效

• 申請號: 201710074244.8
• 申請日: 2017-02-10
• 公開（公告）號: CN107058224B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 王進輝;李東升;許峻榮;陳智聰;楊陽;鐘翠婷;于莉
• 申請（專利權）人: 廣東唯泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;A01N1/02
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 許英偉

本發明提供了一種以胎盤為來源的造血干細胞提取及凍存方法，其中提取方法包括：對采集到的胎盤及母血進行清洗和檢測；用灌洗液對檢測合格的胎盤分多次進行灌洗得到含造血干細胞的灌洗液；對提取到的含造血干細胞的灌洗液進行濃縮純化，得到造血干細胞群。本發明中造血干細胞提取過程采用的灌洗方法設備簡單，操作方便，且封閉的灌洗系統能夠有效避免空氣中細菌的感染，該灌洗方法提取造血干細胞的回收率非常高，有效避免了資源浪費。造血干細胞的凍存過程采用程序控溫，并根據造血干細胞凍存過程中的升溫及降溫的規律設定相應的凍存速率，能最大限度的保護造血干細胞不受損傷。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種以胎盤為來源的造血干細胞提取及凍存方法。

背景技術

造血干細胞，是從卵黃囊全能間葉細胞分化而來的最原始的造血細胞，是體內所有血細胞的前體，是一類具有自我更新能力并能分化為各種血細胞前體細胞，最終生成包括紅細胞、白細胞和血小板在內的各種血細胞，同時也可以分化成其他細胞。因此，其廣泛應用于治療惡性血液病、重型再生障礙性貧血、某些實體瘤、某些異常免疫病、某些遺傳病、代謝病和極重度骨髓型急性放射病。同時，造血干細胞移植也是為癌癥患者重建正常的造血和免疫功能的有效手段。

據研究表明胎盤組織中造血干細胞的含量是臍帶血中造血干細胞含量的8-10倍，造血干細胞的數量大，且胎盤作為分娩后的廢棄物，不需要侵入性過程來獲取，且其造血干細胞的含量和增殖能力也具有明顯優勢，因此，以胎盤為來源進行造血干細胞移提取的方法能有效解決骨髓或動員后外周血來源不足，臍帶血中造血干細胞數量不夠成人使用等技術難題。

然而，目前以胎盤為來源的造血干細胞分離提取方法主要為機械酶解法和傳統灌洗法兩種。機械酶解法雖然能獲取數量較多的細胞，但其中的造血干細胞含量較低，同時很難避免胎盤中母源性細胞的干擾。傳統灌洗法整個提取過程操作繁復、耗時長、成本高，提取出來的細胞活率相對較低。胎盤造血干細胞的凍存多為非程控降溫保存為主，該方法具有細胞存活率低、操作過程復雜、干細胞安全難以保證等缺點。

因此，現有技術還有待于改進和發展。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種以胎盤為來源的造血干細胞提取及凍存方法，旨在解決現有的造血干細胞提取方法中造血干細胞含量較低，提取過程操作繁瑣，且凍存過程中操作復雜、干細胞存活率低等問題。

本發明的技術方案如下：

一種以胎盤為來源的造血干細胞提取方法，其中，包括：

步驟A、對采集到的胎盤及母血進行清洗和檢測；

步驟B、用灌洗液對檢測合格的胎盤分多次進行灌洗得到含造血干細胞的灌洗液；

步驟C、對提取到的含造血干細胞的灌洗液進行濃縮純化，得到造血干細胞群。

所述的以胎盤為來源的造血干細胞提取方法，其中，步驟A具體包括：

A1、先用75%酒精噴灑胎盤外表面1～5min，再用組織保護液清洗胎盤外表面的殘留血液和血凝塊，得到胎盤和母血樣本；

A2、對胎盤和母血樣本進行健康指標檢測。

所述的以胎盤為來源的造血干細胞提取方法，其中，步驟B具體包括：

B1、將注入軟管頭插入胎盤臍動脈中，并將回收軟管頭插入臍靜脈中，再用止血鉗夾緊；

B2、將灌洗液通過注入軟管頭注入胎盤，然后通過回收軟管頭來回收，得到含造血干細胞的灌洗液；

B3、重復上述步驟B2，并將獲得的含造血干細胞的灌洗液混合。

所述的以胎盤為來源的造血干細胞提取方法，其中，所述步驟B中，分三次進行灌洗，其中，