[發明專利]一種共載化學抗腫瘤藥物和anti?Fas抗體的納米載藥體系的制備方法

在審

• 申請號: 201710071053.6
• 申請日: 2017-02-09
• 公開（公告）號: CN106943599A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 許佩佩;胡勇;陳兵;汪帆;左華芹
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: A61K45/06
• 分類號: A61K45/06;A61K47/34;A61K47/42;A61K47/10;A61P35/00;A61K39/395;A61K31/475;A61K31/4745;A61K31/704
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司32252
• 代理人: 戴朝榮

技術領域

本發明屬于制藥領域，尤其涉及一種基質金屬蛋白酶響應的共載化學抗腫瘤藥物和anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，實現免疫治療-化學藥物治療聯合的智能型納米載藥體系的制備工藝。

背景技術

惡性腫瘤是嚴重威脅人類的重大疾病，目前的治療方法主要包括手術治療、藥物治療、放射治療，其中藥物治療包括常規化學藥物治療、靶向藥物治療、以及新興的免疫治療。作為腫瘤治療重要的組成部分，常規化學藥物治療在延長生命、改善健康方面發揮了重要的作用。但常規化學藥物如阿霉素，在殺傷腫瘤細胞的同時，對人體正常細胞造成可逆或不可逆性損傷，表現為一系列的毒副反應，包括消化道反應、骨髓抑制、器官毒性、神經毒性等，嚴重阻礙了化療藥物在臨床上的應用。

納米技術可以與抗腫瘤藥物相結合，包載化療藥物的納米顆粒腫瘤滲透滯留效應強，可增加常規化療藥物在腫瘤組織中的聚集，即化療藥物“被動靶向性”增強；同時通過在納米顆粒上連接抗體、肽鏈等配體介導胞吞作用達到化療藥物“主動靶向性”，進一步減少對正常組織的毒副作用。

基質金屬蛋白酶(MMPs)是一大類和細胞外基質降解有關的鋅指內肽酶。腫瘤細胞通過旁分泌促進基質細胞分泌,并募集MMPs到腫瘤細胞周圍。由于腫瘤的產生、轉移必須首先突破腫瘤原發部位的細胞外基質，因此，可降解基質的MMPs在腫瘤的發生發展、特別是侵襲和轉移中，扮演了重要的角色。MMPs家族中，MMP-2和MMP-9可降解明膠蛋白，Ⅳ型、Ⅴ、Ⅶ和Ⅺ型膠原，纖維黏連蛋白、層黏連蛋白等，在腫瘤的生長、侵襲轉移等過程中有重要的地位。針對MMP-2和MMP-9的藥物設計，對于腫瘤的靶向治療，進一步提高抗癌藥物在腫瘤部位的療效以及降低其對機體的毒副作用有著重要的意義。

免疫治療是通過增強免疫系統對腫瘤細胞識別和(或)細胞毒性作用達到治療目的。Fas-FasL通路介導凋亡是免疫系統中及其重要的一種調節機制，細胞毒淋巴細胞(CTL)識別靶細胞后，細胞表面表達高水平FasL與靶細胞表面的Fas相互識別，通過Fas-FasL通路觸發靶細胞內部的凋亡程序，使靶細胞發生程序性細胞死亡。Fas-FasL通路在腫瘤細胞的凋亡和免疫逃逸的過程發揮重要的作用，可通過Fas-FasL通路實現抗腫瘤治療。目前多采用抗體技術解除T細胞的制動器，或體外對T細胞進行基因修飾增強T細胞表面的FasL表達。這些技術復雜、適用面窄、費用昂貴，臨床應用局限。因Fas抗原在人體各組織中分布廣泛，為非特異性抗原分子，直接采用外源性anti-Fas抗體(類內源性FasL)或水溶性FasL(sFasL)將導致體內正常的免疫系統遭受破壞，產生免疫性疾病。

因此，本發明設計了一種新型智能型的納米藥物載體，通過與腫瘤微環境中MMPs響應可程序性地在腫瘤組織中釋放anti-Fas抗體及小分子抗腫瘤藥物，增強藥物的腫瘤靶向性，同時通過Fas-FasL通路及化學抗腫瘤藥物聯合作用增強抗腫瘤效果。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種實現與腫瘤微環境中MMPs響應，程序性、持續性地在腫瘤組織中釋放anti-Fas抗體及小分子抗腫瘤藥物，增強藥物的腫瘤靶向性及抗腫瘤效果，集納米載藥可控緩釋、被動靶向、主動靶向、酶響應性與免疫治療-化學藥物治療聯合等多種優勢于一體的一種基質金屬蛋白酶響應的共載化學抗腫瘤藥物和anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法。

為達到上述目的，本發明提供的技術方案是：

一種基質金屬酶響應的anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，包括以下步驟：

a.通過開環聚合法制備官能化的聚己內酯PCL-COOH和PCL-NH₂；

b.制備甲氧基聚乙二醇肽鏈(mPEG–Pep)，然后將步驟a中制得的官能化的聚己內酯(PCL-NH₂)和mPEG-Pep、二甲基氨基吡啶(DMAP)、二氯乙烷(EDC)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)混合反應，透析，于透析袋中液體凍干,制得mPEG–Pep-PCL；

c.將步驟a中制得的PCL-COOH和NHS、EDC混合溶于DMF溶液中反應，隨后純水中透析，透析袋中液體凍干，制得PCL-NHS粉末；將PCL-NHS、氨基-聚乙二醇-羧基溶于DMF溶液反應，隨后混合液在透析袋中透析，透析袋中液體凍干，制得PCL-PEG-COOH粉末；