[發(fā)明專利]一種共載化學抗腫瘤藥物和anti?Fas抗體的納米載藥體系的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710071053.6
• 申請日: 2017-02-09
• 公開（公告）號: CN106943599A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 許佩佩;胡勇;陳兵;汪帆;左華芹
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫(yī)院
• 主分類號: A61K45/06
• 分類號: A61K45/06;A61K47/34;A61K47/42;A61K47/10;A61P35/00;A61K39/395;A61K31/475;A61K31/4745;A61K31/704
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司32252
• 代理人: 戴朝榮

1.一種基質金屬酶響應的anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

a.通過開環(huán)聚合法制備官能化的聚己內酯PCL-COOH和PCL-NH₂；

b.制備甲氧基聚乙二醇肽鏈mPEG–Pep，然后將步驟a中制得的PCL-NH₂和mPEG-Pep、DMAP、EDC、NHS混合反應，透析后將透析袋中截留液體凍干,制得mPEG–Pep-PCL；

c.將步驟a中制得的PCL-COOH和NHS、EDC混合溶于DMF溶液中反應，隨后純水中透析，透析袋中液體凍干，制得PCL-NHS粉末；將PCL-NHS、氨基-聚乙二醇-羧基溶于DMF溶液反應，隨后混合液在透析袋中透析，透析袋中液體凍干，制得PCL-PEG-COOH粉末；

d.采用納米沉淀法制備包載小分子抗腫瘤藥物的納米粒,將步驟b制得mPEG–Pep-PCL、步驟c制得PCL-PEG-COOH和小分子抗腫瘤藥物溶解在溶劑中,然后將混合溶液逐滴加到純水中，隨后將混合溶液超聲、攪拌4-8分鐘形成乳液；通過蒸發(fā)除去溶劑，制得包載小分子抗腫瘤藥物的mPEG–Pep-PCL@PCL-PEG-COOH的智能型納米粒子(小分子抗腫瘤藥物-loaded NPs)；

e.將步驟d制得小分子抗腫瘤藥物-loaded NPs粉末在pH4.5～5.5的N-嗎啉乙磺酸溶液中，加入含0.1mol/L EDC的MES溶液和含0.1mol/L NHS的MES溶液，活化智能型納米粒子表面PCL-PEG-COOH的羧基；攪拌后將活化的納米粒子懸浮液離心，收集納米粒子；隨后將納米粒子在0.1mol/L磷酸鹽緩沖液中重懸；洗去未參與反應的EDC和NHS，最終將納米粒子在1ml PBS溶液中重懸，加入anti-Fas抗體反應40-50小時；離心除去未連接抗體，制得基質金屬蛋白酶響應的共載小分子抗腫瘤藥物和anti-Fas抗體的智能型納米載藥體。

2.根據權利要求1所述的基質金屬酶響應的anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，其特征在于：所述小分子抗腫瘤藥物為蒽環(huán)類、生物堿類抗腫瘤藥物。

3.根據權利要求1所述的基質金屬酶響應的anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，其特征在于：所述小分子抗腫瘤藥物為阿霉素、柔紅霉素、長春新堿、喜樹堿、紫杉醇。

4.根據權利要求1所述的基質金屬酶響應的anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，其特征在于：所述步驟a中,用亮氨酸為引發(fā)劑，將ε-己內酯單體、亮氨酸以摩爾比為100-120:1-1.2的比例加入聚合管中，通過開環(huán)聚合法制備PCL-COOH；將PCL-COOH溶解在二甲基甲酰胺中，加入乙二胺、二氯乙烷、N-羥基琥珀酰亞胺和二甲基氨基吡啶，反應制得PCL-NH₂。

5.根據權利要求1所述的基質金屬酶響應的anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，其特征在于：所述步驟b中,將甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺和肽鏈按摩爾比1.0-1.2:1.2-1.5溶于含有2.5-3.5％的三乙胺的DMF溶液中，18-25℃攪拌反應3-6小時，5500Da透析袋中純水中透析40-50小時，除去未反應的mPEG-NHS和肽鏈，所得溶液凍干，制得甲氧基聚乙二醇肽鏈mPEG–Pep；將步驟a中PCL-NH2和mPEG-Pep、DMAP、EDC、NHS按照摩爾比1.2:1:1:1:1混合反應制備mPEG–Pep-PCL。

6.根據權利要求1所述的基質金屬酶響應的anti-Fas抗體智能型納米載藥體系的制備方法，其特征在于：所述步驟c中,將NHS、EDC和步驟a中制得PCL-COOH按照摩爾比1.2:1:1混合反應制備PCL-NHS粉末；將PCL-NHS、氨基-聚乙二醇-羧基按照摩爾比為1-1.5:1-2反應制得PCL-PEG-COOH粉末。