[發(fā)明專利]一種G-四聯(lián)體增強(qiáng)型膠體金層析試紙條

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710070859.3
• 申請(qǐng)日: 2017-02-09
• 公開（公告）號(hào): CN108414746A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許文濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京言必信科技有限公司;中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 黃玉玨

本發(fā)明涉及一種G?四聯(lián)體增強(qiáng)型膠體金層析試紙條，以膠體金顆粒作為信號(hào)，其特征在于：試紙條包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊和背板，所述背襯上依次粘附有樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊；所述結(jié)合墊粘附于所述樣品墊之上，并與所述反應(yīng)墊相搭接；所述反應(yīng)墊與所述吸收墊相搭接；將可以特異性識(shí)別的抗體或核酸以條帶狀固定在硝酸纖維素膜上，并將G?四聯(lián)體與抗體或核酸的膠體金復(fù)合物吸附在結(jié)合墊上，所述硝酸纖維素膜上具有檢測線和質(zhì)控線；所述檢測帶與所述質(zhì)控帶的距離為5mm～10mm。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測裝置裝置，特別是一種G-四聯(lián)體增強(qiáng)型膠體金層析試紙條。

背景技術(shù)

膠體金層析試紙條以膠體金顆粒作為信號(hào)，由以下五個(gè)不同的部分組成：樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊和背板。

膠體金試紙條有兩類，分為基于免疫依賴原理和基于核酸依賴原理：

基于免疫依賴原理的膠體金層析試紙條是利用免疫分析技術(shù)與試紙法的結(jié)合，是基于醫(yī)學(xué)中的血清學(xué)檢測方法以抗原與抗體反應(yīng)為檢測手段來進(jìn)行檢測。

基于核酸依賴原理的膠體金層析試紙條是利用分子生物學(xué)技術(shù)與試紙法的結(jié)合，檢測過程與核酸的復(fù)性或核酸的特異性反應(yīng)有關(guān)。

膠體金試紙條是的使用方法非常簡便，其使用者不需要經(jīng)過專業(yè)訓(xùn)練，只需要觀察檢測線和質(zhì)控線的顏色變化即可完成檢測，任何工作人員都能輕松快速地學(xué)會(huì)。膠體金層析試紙條因其具有制作簡單、使用方便、價(jià)格低廉、靈敏性好、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、反應(yīng)迅速、無需設(shè)備、結(jié)果顯示直觀、一次性使用、不需檢修維護(hù)等特點(diǎn)，在食品質(zhì)量安全快速檢測和人類健康診斷方面有良好的應(yīng)用前景。

膠體金顆粒的靈敏度不足，很難檢測痕量的待測物質(zhì)。現(xiàn)有的提高靈敏度的方法中，辣根過氧化物酶增強(qiáng)法是最為成熟且高效的一種途徑。但是，辣根過氧化物酶是蛋白質(zhì)大分子，不僅穩(wěn)定性較差、儲(chǔ)存條件苛刻、價(jià)格較高，而且在膠體金顆粒上修飾效率較低。希望可以找到一種新型增強(qiáng)材料代替辣根過氧化物酶，克服上述缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明一種G-四聯(lián)體增強(qiáng)型膠體金層析試紙條，以膠體金顆粒作為信號(hào)，試紙條包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊和背板，所述背襯上依次粘附有樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸收墊；所述結(jié)合墊粘附于所述樣品墊之上，并與所述反應(yīng)墊相搭接；所述反應(yīng)墊與所述吸收墊相搭接；將可以特異性識(shí)別的抗體或核酸以條帶狀固定在硝酸纖維素膜上，并將G-四聯(lián)體與抗體或核酸的膠體金復(fù)合物吸附在結(jié)合墊上，所述硝酸纖維素膜上具有檢測線和質(zhì)控線；所述檢測帶與所述質(zhì)控帶的距離為5mm～10mm。

不同種類的生色底物均可以用于G-四聯(lián)體增強(qiáng)型膠體金層析試紙條，包括2'-聯(lián)氨-雙(3- 乙基苯并賽唑啉-6-磺酸)-二胺鹽(ABTS)、3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC)、鄰苯二胺(OPD)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)，其中，AEC的增強(qiáng)效果最為明顯。

G-四聯(lián)體與抗體或核酸的膠體金復(fù)合物合成步驟為：

1)膠體金顆粒的制備

將50mL的2.4×10^-4M HAuCl₄水溶液加熱至沸騰，然后加入1.67mL的1％檸檬三鈉，將沸騰溶液再攪拌30分鐘，然后在使用前在4℃下儲(chǔ)存；

2)G-四聯(lián)體與膠體金復(fù)合物的制備：

G-四聯(lián)體的DNA序列為/SH C6/-AAAAAACTGGGAGGGAGGGAGGG，20μL的100 mM G-四聯(lián)體DNA溶液與980μL的上述膠體金溶液混合并持續(xù)攪拌，緩慢加入50mM的 NaCl并孵育12h，然后，將溶液在12000×g下離心20min，所得沉淀即為G-四聯(lián)體與膠體金復(fù)合物；

3)G-四聯(lián)體與抗體的膠體金復(fù)合物的制備