[發明專利]嵌合抗原受體及其基因和重組表達載體、CARHER2-NKT細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710068756.3
• 申請日: 2017-02-08
• 公開（公告）號: CN108395480A
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 王曉慧;列浦昌
• 申請（專利權）人: 廣州百尼夫生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 蒲琳;王崇

本發明屬于腫瘤生物制品技術領域，本發明公開了一種嵌合抗原受體及其基因和重組表達載體、工程化HER2靶向性的NKT細胞及其應用，所述嵌合抗原受體為HER2ScFv?CD8?CD137?CD3ζ，包括串聯的CD8a信號肽、HER2ScFv、縮短CD8的鉸鏈區和跨膜區、CD137的胞內信號結構域和CD3ζ的胞內信號結構域。本發明的CARHER2?NKT細胞在治療進展期HER2陽性的上皮腫瘤時，對上皮腫瘤具有一定的治療效果。

技術領域

本發明屬于腫瘤生物制品技術領域，具體地，涉及過繼免疫治療中的一種嵌合抗原受體HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重組表達載體、工程化HER2靶向性的NKT細胞(CARHER2-NKT細胞)及其制備方法和應用。

背景技術

自然殺傷細胞(NKT)是一種特殊類型的T淋巴細胞亞群，其既表達T細胞表面標志，又表達NK細胞的表面標志。NKT細胞的抗原識別與傳統的T細胞不同，其不能識別由經典的MHC-I、Ⅱ類分子提呈的抗原肽，而只能夠被非經典的MHC-I類分子CDId所提呈的糖脂抗原活化，并迅速產生多種細胞因子，如：IL-4、IFN-γ，IL-10、IL-13等，從而能夠識別和殺傷突變的腫瘤細胞和病毒感染細胞，而對正常自身組織細胞無毒性作用。NKT細胞通過自身表面的CD16與特異性抗體的Fc段結合，發揮ADCC(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity)作用。但在抗體依賴的細胞介導的殺傷作用過程中，由于抗體能與靶細胞上的相應抗原表位特異性結合，NKT細胞可殺傷任何已與抗體結合的靶細胞，雖然抗體與靶細胞上的抗原結合是特異性的，但NKT細胞對靶細胞的殺傷作用是非特異性的。通常情況下，輸注的NKT細胞在患者體內半衰期為2周左右，有效期短暫，需要反復多次輸注。另外，NKT細胞本身缺少特異性抗體，不足以在腫瘤周圍或者瘤巢中富集，制約了NKT細胞對惡性腫瘤的靶向治療。而且，研究表明，NKT細胞不是對所有的腫瘤都有殺傷效果，對部分實體瘤的殺傷作用比較弱，特異殺傷活性有待提高。

HER2，是人類表皮生長因子受體(HER)家族成員之一，在正常的細胞中，HER2能夠控制細胞的增殖、遷移、分化等來維持細胞的正常生物學活性。而HER2過度激活后，能夠通過影響基因的轉錄及影響蛋白的穩定性，引起基因表達的改變，激活增殖相關的信號通路，抑制細胞凋亡信號通路，從而增加腫瘤的發生、血管的形成以及腫瘤細胞的遷移等。研究發現在許多表皮腫瘤及癌癥中，HER2呈現普遍高表達的現象，包括膽管癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、食管癌、前列腺癌、胃癌或口腔癌等。HER2高表達的患者，其腫瘤的侵潤性、復發及預后不良程度也很高。基于以上現象，靶向HER2的治療策略研究具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術中NKT細胞對實體瘤的殺傷作用比較弱、特異殺傷活性有待提高的缺陷，提供一種嵌合抗原受體HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重組表達載體、工程化HER2靶向性的NKT細胞(CARHER2-NKT細胞)及其制備方法和應用。

本發明的發明人在研究中意外發現，本發明的嵌合抗原受體HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ對NKT細胞具有高的感染效率，且感染后得到的CARHER2-NKT細胞在體外有高效的殺瘤活性，在治療HER2陽性實體瘤時，對腫瘤細胞具有一定的特異殺傷活性，尤其是在治療進展期HER2陽性的上皮腫瘤患者時，對上皮腫瘤具有一定的治療效果。

因此，為了實現上述目的，第一方面，本發明提供了一種嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體為HER2ScFv-CD8-CD137-CD3ζ，包括串聯的CD8a信號肽、HER2ScFv、縮短CD8的鉸鏈區(hinge區)和跨膜區、CD137的胞內信號結構域和CD3ζ的胞內信號結構域。

第二方面，本發明提供了編碼上述嵌合抗原受體的基因。

第三方面，本發明提供了含有上述基因的重組表達載體。