[發明專利]一種中國蜂膠黃酮提取物及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710068269.7
• 申請日: 2017-02-07
• 公開（公告）號: CN106892889B
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發明（設計）人: 胡福良;程曉雨;鄭宇斐;張翠平;鄭火青
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07D311/32
• 分類號: C07D311/32;C07D311/30;C07D311/40;A61P35/00;A61K35/644
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

1.一種中國蜂膠黃酮提取物的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實現：

（1）石油醚除雜：粉碎中國蜂膠后完全浸泡于石油醚中24 h，攪拌均勻，過濾，自然揮干，得到的蜂膠毛膠顆粒，并將石油醚回收利用；

（2）超聲波輔助提?。喝〔襟E（1）得到的蜂膠毛膠顆粒，按料液比1:5~1:15 g/mL的比例，用75~95%的乙醇溶液提取2~4次，每次提取15~45 min，過濾，合并濾液，并通過旋轉蒸發儀和鼓風式烘箱揮干溶劑至恒重，蒸發濃縮至凈膏狀，得蜂膠黃酮粗提物；

（3）硅膠薄層色譜分離：以200-300目的硅膠作蜂膠黃酮進行靜態吸附劑，4:1、3:1、2:1(v/v)石油醚-乙酸乙酯雙相溶劑為硅膠柱層析洗脫劑，且每個體積比洗脫3個柱體積，蜂膠與硅膠的質量比為1:35，洗脫流速為2 mL/min，利用旋轉蒸發儀、氮吹儀和冷凍干燥機進行濃縮、干燥；

（4）硅膠薄層色譜分離：取步驟（2）得到的蜂膠凈膏配成5 mg/mL的乙醇溶液，在硅膠板上點樣，并置于展開槽中展開，10 min后，取出自然晾干，并于254 nm下觀察和測量Rf值，選取Rf值在0.25~0.35之間且無拖尾現象的作為最佳體積比的雙溶劑體系；

（5）硅膠柱層析純化：將步驟（2）得到的蜂膠凈膏配置成20 mg/mL的乙醇溶液，與質量比為1:35的硅膠粉混合均勻，揮干乙醇后倒入硅膠層析柱中，鋪上一層海砂，先用石油醚沖洗，算出一個柱體積，然后依次加入5:1、4:1、3:1或4:1、3:1、2:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑體系進行分步洗脫，每個梯度沖洗3個柱體積，控制流速為1~2 mL/min，每1/3個柱體積收集一管，合并Rf值相近的蜂膠黃酮洗脫液；

（6）濃縮干燥：通過觀察洗脫液的顏色及在254 nm下的Rf值，先利用旋轉蒸發儀揮去黃酮含量較高組的溶劑，再利用無水乙醇反復沖洗，去除上層混雜的樹膠，最后在氮吹儀、冷凍干燥機下干燥至恒重，得到精制的蜂膠黃酮提取物；

提取物中總黃酮的重量百分含量以蘆丁計，在54.3%~89.3%之間，該總黃酮提取物含量最高的5種黃酮單體依次為：短葉松素、松屬素、短葉松素-3-乙酸酯、白楊素和高良姜素。

2.根據權利要求1所述的一種中國蜂膠黃酮提取物的制備方法，其特征在于，步驟（2）得到的蜂膠黃酮粗提物，蜂膠黃酮粗提物的總黃酮含量從蜂膠毛膠中的9.41%提高到20.3~28.6%。

3.根據權利要求1所述的一種中國蜂膠黃酮提取物的制備方法，其特征在于，步驟（3）條件下，總黃酮含量從24.76%提高到54.3%~89.3%。

4.根據權利要求1所述的一種中國蜂膠黃酮提取物的制備方法，其特征在于，步驟（5）所用的硅膠粉為200~300目，揮干乙醇后倒入硅膠層析柱中，并用增氧泵夯實，表面平整后鋪上一層海砂。