[發明專利]嬰幼兒食品及奶粉中多聚果糖含量的離子色譜法測定方法

在審

• 申請號: 201710067924.7
• 申請日: 2017-02-07
• 公開（公告）號: CN106706813A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 吳玉平;張鳳霞;徐娟;田燕
• 申請（專利權）人: 中檢科（北京）測試技術有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/64
• 代理公司: 北京格旭知識產權代理事務所(普通合伙)11443
• 代理人: 雒純丹

技術領域

本發明涉及分析化學領域，尤其是涉及含多聚果糖的制品中，多聚果糖含量的測定方法。采用帶積分安培檢測器的離子色譜儀，檢測制品中的多聚果糖含量。

背景技術

多聚果糖是從菊苣根中提取的、具有保健功能的低聚糖，由α-果糖以β-1,2糖甙鍵連接，在其末端連接一個葡萄糖殘基而形成，分子式為(C₆H₁₂O₆)-(C₆H₁₂O₅)_n(n2-60)，平均聚合度大于等于23，相對分子質量344-11400。多聚果糖是一種良好的“益生元”，具有調節腸道菌群、增殖雙歧桿菌、促進鈣吸收的作用。我國GB14880-2012《食品營養強化劑使用標準》中規定嬰幼兒配方食品、奶粉中，多聚果糖用量不超過64.5g/kg。

多聚果糖的測試方法有液相色譜法、離子色譜法、分光光度法、酶聯免疫試劑盒法。嬰幼兒食品和奶粉中含有多種對多聚果糖測定干擾的物質。該領域常用的多聚果糖測試方法為用乙醇提取，然后再進行測試，然而僅低聚果糖(聚合度為2-8)可溶于乙醇，而更高聚合度的果聚糖是不溶于乙醇的。

發明內容

本發明解決的技術問題是：為了克服現有嬰幼兒食品及奶粉中多聚果糖含量測定方法中，干擾物質過多造成的測試結果不準確的缺陷，提供一種嬰幼兒食品及奶粉中多聚果糖含量的離子色譜法測定方法。將嬰幼兒食品及奶粉樣品酶解，將低聚糖轉化成單糖，用帶積分安培檢測器的離子色譜儀分別檢測酶解前的樣品和酶解后的樣品，折算出低聚糖的含量。本發明可以把果糖和蔗糖目標峰分開，靈敏度和檢出限較低。

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種含多聚果糖制品中多聚果糖含量的測定方法，該方法包括：

(1)將含多聚果糖的溶液與淀粉酶接觸，得到第一溶液；

(2)將等量的兩份第一溶液，分別與葡聚酶/果糖酶復合酶溶液和醋酸鹽緩沖液接觸，得到第二溶液和第三溶液；

(3)將第二溶液和第三溶液冷卻處理；

(4)將步驟(3)冷卻處理后的第二溶液和第三溶液稀釋，得到稀釋液A和稀釋液B；以及

(5)采用離子色譜法測試稀釋液A中的果糖濃度，稀釋液B中的蔗糖濃度和果糖濃度，計算得到多聚果糖的含量。

優選的，步驟(4)中，將驟(3)冷卻處理后的第二溶液和第三溶液稀釋至果糖和/或蔗糖的線性區間是0.5～20μg/mL，然后0.20-0.30μm濾膜過濾，優選采用0.22μm濾膜過濾。

優選的，所述離子色譜法，流動相：A為H₂O，B為100mM NaOH，C為100mM NaOH+500mM NaHAC；

梯度洗脫條件為：0-20min，A：B：C＝90:10：0；20-25min，A：B：C＝0:0：100；25-50min，A：B：C＝90:10：0。

優選的，步驟(1)中，將含多聚果糖的溶液與淀粉酶在40-80℃，優選60℃水浴振蕩25-60分鐘，優選30分鐘，然后冷卻；其中，淀粉酶的用量為：8-9g/L，優選8.33g/L。

優選的，所述醋酸鹽緩沖液的醋酸根離子濃度為0.2mol/l。

優選的，所述葡聚酶/果糖酶復合酶溶液為含有葡聚酶和果糖酶的醋酸鹽緩沖液，其中葡聚酶含量為10-15mg/100ml醋酸鹽緩沖液，果糖酶含量為5-10mg/100ml醋酸鹽緩沖液。

優選的，步驟(2)中，所述葡聚酶/果糖酶復合酶溶液與第一溶液的體積比用量為1:1，所述醋酸鹽緩沖液與第一溶液的體積比用量為1:1。

優選的，步驟(2)中，將等量的兩份第一溶液，分別與葡聚酶/果糖酶復合酶溶液和醋酸鹽緩沖液，50-70℃水浴振蕩50-70分鐘，優選60℃水浴振蕩60分鐘。

優選的，多聚果糖LcFOS的含量由下述公式計算得到

LcFOS＝K×(F-S/1.9)；

其中，K為換算系數，由下述公式計算得到，

在該公式中，n為多聚果糖的平均聚合度；

F為酶解得到的果糖的含量，單位為毫克每百克(mg/100g)，由下述公式計算得到，

c_a為稀釋液A中的果糖的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；

c_b為稀釋液B中的果糖的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；

f為第二溶液和第三溶液的稀釋倍數；

m為含多聚果糖的溶液中的固含量，單位為克(g)；