[發明專利]一種豬肝細胞無血清培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 201710067361.1
• 申請日: 2017-02-07
• 公開（公告）號: CN107043738A
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發明（設計）人: 唐勝球;江青艷;董小英;朱曉彤;賓艷芳;周桂炫;方心靈
• 申請（專利權）人: 韶關學院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 廣州駿思知識產權代理有限公司44425
• 代理人: 吳靜芝

1.一種豬肝細胞無血清培養基，其在基礎培養液中添加有如下組分：牛胰島素10.00mg/L，人轉鐵蛋白5.50mg/L，亞硒酸鈉5.02μg/L，乙醇胺2.00mg/L，地塞米松196.26μg/L，纖粘連蛋白0.5mg/L，維生素C 10.00mg/L，肝細胞生長因子60.00μg/L，表皮生長因子80.00μg/L，胰高血糖素2.00mg/L和牛血清白蛋白1.50g/L。

2.根據權利要求1所述的豬肝細胞無血清培養基，其特征在于：所述基礎培養液為Williams’Medium E基礎培養液。

3.根據權利要求2所述的豬肝細胞無血清培養基，其特征在于：所述基礎培養液為包含有青霉素和鏈霉素的Williams’Medium E基礎培養液。

4.一種制備權利要求1-3中任一所述的豬肝細胞無血清培養基的方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1：于無菌環境中，按所述各組分的含量配制各組分的母液；

S2：將各組分的母液按比例加入基礎培養液中，充分混勻，即得到所述的豬肝細胞無血清培養。

5.根據權利要求4所述的制備豬肝細胞無血清培養基的方法，其特征在于：步驟S1中，各組分的母液的配制方法如下：

將牛胰島素、人轉鐵蛋白、亞硒酸鈉和乙醇胺溶解于水中，配制成含有10μg/mL牛胰島素、5.5μg/mL人轉鐵蛋白、2.9×10^-8M亞硒酸鈉和2μg/mL乙醇胺的母液；

將地塞米松干粉溶解于無水乙醇中，配制成濃度為1mg/mL的地塞米松乙醇溶液，然后用基礎培養液稀釋至濃度為0.1mg/mL，得到地塞米松母液；

將纖粘連蛋白溶解于PBS緩沖液中，配制成濃度為0.5mg/mL的纖粘連蛋母液；其中，所述的PBS緩沖液為含0.1wt％的牛血清白蛋白(BSA)的無Ca²⁺、Mg²⁺的PBS緩沖液，其pH為6.4～6.8；

將維生素C溶解于水中，配制成濃度為10mg/mL的維生素C母液；

將肝細胞生長因子溶解于水中，配制成濃度為200μg/mL的肝細胞生長因子母液；

將表皮生長因子溶解于水中，配制成濃度為200μg/mL的表皮生長因子母液；

將胰高血糖素溶解于水中，配制成濃度為4.00mg/mL的胰高血糖素母液；

將牛血清白蛋白溶解于基礎培養液中，配制成濃度為50mg/mL的牛血清白蛋白母液。

6.根據權利要求4所述的制備豬肝細胞無血清培養基的方法，其特征在于：所述基礎培養液在使用時添加濃度為100IU/mL的青霉素與濃度為100IU/mL的鏈霉素。