[發明專利]牛冷凍精液稀釋液制備方法

在審

• 申請號: 201710065529.5
• 申請日: 2017-02-06
• 公開（公告）號: CN106818709A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 潘越博;黃龍艷;黃龍梅;張登輝;盧旺銀;賀軍;王璽年;劉輝
• 申請（專利權）人: 潘越博
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于畜牧業養殖技術領域，涉及一種牛冷凍精液稀釋液制備方法。

背景技術

牛冷凍精液與人工授精技術在我國養牛業生產中已廣泛應用，因此牛冷凍精液的生產與質量控制一直受到行業內的關注。

實踐證明，冷凍精液生產是各地種公牛站的核心業務，該生產流程體系應該建立在標準化作業程序的基礎上，包括生產牛冷凍精液的器械清洗與消毒、稀釋液配制、采精、精液處理、精液冷凍、凍精解凍、凍精鏡檢和檢驗規則、凍精包裝、凍精貯存及凍精運輸等操作環節。

目前大部分種公牛站以進口稀釋粉取代自配精液稀釋液，進口稀釋粉在某種程度上取得了較好效果，但從長遠考慮這增加了牛冷凍精液的生產成本，降低了經濟效益，同時也反映出牛冷凍精液稀釋液配方的缺陷。

眾觀各地種公牛站冷凍精液稀釋液，不論是自配的或是進口的，其中均包括稀釋劑、營養劑、保護劑和其他添加劑等。目前，牛冷凍精液稀釋液多數為葡萄糖-甘油-卵黃液，但稀釋劑、營養劑、保護劑又有可選的不同化學物質和劑量組合，大部分種公牛站反映進口稀釋液比自配稀釋液稀釋效果好。

牛細管凍精質量高低與假陰道安裝調試、種公牛準備與調教、采精人員技術水平、采精操作的規范性、精液品質評價與稀釋倍數計算、稀釋液配方與配制、精液稀釋過程的規范性、稀釋精液冷凍過程等多項因素有關。各環節操作人員大部分進過職業技能培訓，規范性較強，最大的區別是精液稀釋液不同，導致稀釋后精子活力偏低。

首先，目前牛細管凍精稀釋液營養劑選擇葡萄糖、蔗糖存在不足，從有利于精子代謝吸收的角度考慮，應選擇果糖，因為果糖結構簡單，在同等條件下更有利于精子代謝吸收，滿足精子營養需求；其次，作為維持精子內外環境滲透壓平衡的檸檬酸鈉，其用量把握不精準，不能維持溶液的等滲性，引起精子變形；第三，青鏈霉素作為抗菌物質，原本是為了提高精子抗污染能力，但用量失控尤其偏多時反而會殺死精子或降低精子活力；第四，雞蛋新鮮度和消毒把控不嚴，營養價值降低；第五，抗凍物質甘油用量不合理，未能達到相應的抗凍效果，超量時反而降低了精子對營養物質的吸收量；第六，牛冷凍精液生產的操作細節缺乏規范性。

總之，稀釋液配方中各物質用量搭配缺乏合理性，同時，有必要進一步探索更科學的牛細管凍精生產工藝。

發明內容

本發明的目的是提供一種牛冷凍精液稀釋液制備方法，解決了現有技術中存在的問題，提高優秀種公牛新鮮精液稀釋效果和精子活率，達到冷凍精液長期有效保存。

本發明所采用的技術方案是，一種牛冷凍精液稀釋液制備方法，按照以下步驟進行：

步驟1：精液稀釋液配置；

按比例，準確稱取果糖5～8g、檸檬酸鈉19.8～26.6 g，無損耗地移入1000 mL的燒杯內，加入蒸餾水800 mL，用消毒過的玻璃棒或磁力攪拌器攪拌，使果糖和檸檬酸鈉充分溶解，然后將溶液用濾紙過濾于三角燒瓶或鹽水瓶中，扎好或塞緊瓶口，置75～80℃水浴鍋中消毒30 min，冷卻至常溫后再加入180～220mL的新鮮卵黃，以及再加入青霉素、鏈霉素各40～50萬IU單位，按此比例配置的溶液稱為第一液；

取第一液430 mL加入65～75 mL甘油，并用磁力攪拌器充分攪拌均勻后放入3℃～5℃的冰箱或生化培養箱內待用，按此比例配置的溶液稱之為第二液；

步驟2：精液稀釋；

用35℃的第一液緩慢地加入原合格精液中，輕輕搖勻，用燒杯盛適量的35℃水，把稀釋管放入后送0～5℃低溫柜內降溫，與此同時把第二液也放入；平衡2h后水杯中加冰塊促使其快速降溫，當降溫至10℃時加入第二液，加入第二液后再平衡30min以上，才能在低溫柜中進行細管分裝，分裝后的細管即可進行冷凍；

步驟3：精液冷凍；

將平衡、封裝后的細管精液按棉塞封口端靠近操作者的方向上架碼放，碼放在平衡架上，超聲波封口端遠離操作者，細管放入冷凍儀時也應如此放置；每個平衡架上放一根細管的標記物，為了便于識別，一頭種公牛用同一顏色的標記物；如果同一個平衡架上有不同種公牛的細管精液，須分開碼放，且要隔開一些距離，以免混淆；

在細管凍精生產過程中，使用由計算機控制的全自動冷凍儀，首先在電腦中設置好最佳冷凍溫度曲線，冷凍儀與低溫柜應盡量靠近，開啟液氮罐閥門把冷凍儀降溫至4℃，關閉風扇電源，待風扇完全停止后把已排滿待凍細管的平衡架迅速輕放人冷凍儀，蓋好蓋子，按預先設定的程序自動完成冷凍過程；

步驟4：凍精解凍與抽檢；