[發明專利]一種快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法在審
| 申請號： | 201710064529.3 | 申請日： | 2017-02-04 |
| 公開（公告）號： | CN106967746A | 公開（公告）日： | 2017-07-21 |
| 發明（設計）人： | 不公告發明人 | 申請（專利權）人： | 深圳萬智聯合科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/84 | 分類號： | C12N15/84;C12Q1/68;A01H5/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市南山區*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 獲得 除草劑 轉基因 高粱 植株 方法 | ||
1.一種快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.將含有目的基因的重組質粒導入高粱；
S2.轉基因高粱的幼胚培養；
S3.抗除草劑篩選；
S4.提取轉基因高粱基因組，PCR檢測。
2.根據權利要求1所述的快速鑒定抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法，其特征在于，所述步驟S1具體操作過程為：
(1)將目的基因插入基礎質粒pAHC25的BamHI和SacI限制性內切酶切位點之間，以目的基因取代pAHC25的gus基因，使目的基因與pAHC25基礎質粒中的抗除草劑bar基因緊密連鎖；
(2)將上步驟獲得的重組質粒采用根癌農桿菌介導法導入高粱，獲得T0代轉基因高粱植株。
3.根據權利要求2所述的快速鑒定抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法，其特征在于，所述步驟S3具體操作過程為：
(1)取T0代轉基因高粱植株開花15天后的幼胚，置于梯度濃度0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L草丁膦除草劑的培養基培養，培養基為MS培養基，挑選具有抗性的幼苗，繼續培養至8cm左右，移栽至室外常規栽培至植株開花；
(2)取上述開花15天后的幼胚，置于梯度濃度0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L草丁膦除草劑的培養基培養，培養基為1/2MS培養基，挑選具有抗性的幼苗，繼續培養至8cm左右，移栽至室外常規栽培，直至后代幼苗不再死亡，該幼苗初步鑒定為抗除草劑bar基因純合的轉基因高粱植株。
4.根據權利要求3所述的快速鑒定抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法，其特征在于，所述步驟S4具體操作過程為：
(1)選取一株上述初步鑒定為抗除草劑bar基因純合的轉基因高粱植株，提取其葉片基因組DNA；
(2)進行PCR檢測是否含有目的基因，如含有目的基因，再對與該株同源同代的所有植株葉片DNA進行目的基因的PCR檢測以驗證目的基因是否純合，如目的基因純合，這些植株即為轉基因高粱純合植株。
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