[發明專利]一種快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法

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• 申請號: 201710064529.3
• 申請日: 2017-02-04
• 公開（公告）號: CN106967746A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 深圳萬智聯合科技有限公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及轉基因高粱育種技術領域，具體地，涉及一種快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法。

背景技術

轉基因植物(Genetically modified plants)是擁有來自其他物種基因的植物。轉基因技術自誕生以來,由于具有針對性強、可以打破物種間的生殖隔離、提高作物育種效率等優點，倍受育種工作者的關注。轉基因作物為社會帶來持續客觀的經濟利益，據已有的統計資料，2012年轉基因種子的全球市場價值為150億美元，2011年轉基因作物帶來的經濟效益為197億美元；轉基因技術為保障全球糧食安全和糧食自給、可持續性發展、減輕貧困和饑餓、幫助緩解氣候變化和全球變暖帶來的挑戰作出重要貢獻。

高粱不僅是重要的食用糧食，還是一種重要的釀酒原料，中國是全球較大的高粱生產國。近些年來，常規育種在提高高粱產量和品質方面進展緩慢，轉基因等生物技術手段為解決這些問題開辟新的途徑。目前，盡管轉基因高粱還沒有在中國商業化，中國科研人員已經開展抗病、抗蟲、耐除草劑、耐旱和改善品質的轉基因高粱的研究，并取得較好的研究進展。

目前高粱的轉基因方法仍以基因槍介導法為主，基因槍法導入的目的基因通常多拷貝居多，后代分離嚴重，需多代連續跟蹤檢測，才能獲得純合的轉基因植株。由于高粱的基因組較大，PCR等檢測較為困難，多代連續跟蹤檢測的工作量非常巨大，需投入大量的人力和物力。因此急需發明一種提高轉基因育種的方法。

發明內容

針對現有技術上的不足，本發明提供一種快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法。

為了解決上述技術問題，本發明通過以下技術方案得以實現：

一種快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法，包括以下步驟：

S1.將含有目的基因的重組質粒導入高粱；

S2.轉基因高粱的幼胚培養；

S3.抗除草劑篩選；

S4.提取轉基因高粱基因組，PCR檢測。

相對于現有技術，本發明的有益效果：

由于本發明前期采用含除草劑的培養基篩選，結合幼胚加代技術，最后只針對同源同代植株中的一株進行PCR檢測，驗證是否含有目標基因，再對與該株同源同代的所有植株進行目的基因的PCR檢測驗證，節省大量的人力和物力，同時幼胚加代技術也節省了目的基因純合過程所需的時間，本發明的檢測周期在半年即可以實現多代純合植株的篩選，大大縮短檢測周期，提高基因工程育種效率，使用本發明的方法檢測轉基因純合植株，其檢出率在35％左右，結合本發明的短周期優點，本發明的方法可以應用在基因工程育種中，提高基因工程育種效率。

附圖說明

此處的附圖被并入說明書中并構成本說明書的一部分，示出了符合本發明的實施例，并與說明書一起用于解釋本發明的原理。

圖1是本發明的流程示意圖。

圖2是本發明使用質粒pAHC25的基因圖譜。

具體實施方式

結合以下實施例對本發明作進一步描述。圖1是本發明的快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法的流程示意圖。

一種快速獲得抗除草劑的轉基因高粱純合植株的方法，包括以下步驟：

S1.將含有目的基因的重組質粒導入高粱；

S2.轉基因高粱的幼胚培養；

S3.抗除草劑篩選；

S4.提取轉基因高粱基因組，PCR檢測。

優選地，以上所述步驟S1具體操作過程為：

(1)將目的基因插入基礎質粒pAHC25的BamHI和SacI限制性內切酶切位點之間，以目的基因取代pAHC25的gus基因，使目的基因與pAHC25基礎質粒中的抗除草劑bar基因緊密連鎖；

(2)將上步驟獲得的重組質粒采用根癌農桿菌介導法導入高粱，獲得T0代轉基因高粱植株；

優選地，以上所述步驟S3具體操作過程為：

(1)取T0代轉基因高粱植株開花15天后的幼胚，置于梯度濃度0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L草丁膦除草劑的培養基培養，培養基為MS培養基，挑選具有抗性的幼苗，繼續培養至8cm左右，移栽至室外常規栽培至植株開花；

(2)取上述開花15天后的幼胚，置于梯度濃度0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L草丁膦除草劑的培養基培養，培養基為1/2MS培養基，挑選具有抗性的幼苗，繼續培養至8cm左右，移栽至室外常規栽培，直至后代幼苗不再死亡，該幼苗初步鑒定為抗除草劑bar基因純合的轉基因高粱植株。