[發明專利]一種中華大蟾蜍溶菌酶在審
| 申請號： | 201710062396.6 | 申請日： | 2017-01-22 |
| 公開（公告）號： | CN107043758A | 公開（公告）日： | 2017-08-15 |
| 發明（設計）人： | 高飛;錢永常 | 申請（專利權）人： | 浙江農林大學 |
| 主分類號： | C12N9/36 | 分類號： | C12N9/36;C12N15/56 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 311300 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 中華 蟾蜍 溶菌酶 | ||
【權利要求書】：
1.一種中華大蟾蜍溶菌酶，其具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
2.如權利要求1所述的一種中華大蟾蜍溶菌酶，其特征在于，溶菌酶重組表達產物對革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌和真菌生長具有抑制作用。
3.如權利要求2所述的一種中華大蟾蜍溶菌酶，其特征在于，所述溶菌酶重組表達產物通過以下步驟合成：
S1、用TRIzol試劑法提取中華大蟾蜍的腺體組織的總RNA，用ReverTra Ace qPCR RT Kit(TOYOBO，Japan)反轉錄試劑盒將總RNA反轉錄為cDNA；
S2、用添加酶切位點的引物
5’-CCGGAATTCAAGTATGAAAAATGCGAACTTGCTA-3’和
5’-CCCTTCGAATTAAAGTTTGCATCCTTGAGTCCA-3’為引物；
以以上步驟合成的cDNA為模板擴增中華大蟾蜍溶菌酶功能域編碼序列片段；
S3、將克隆片段用DNA純化試劑盒進行純化，純化后的DNA片段與pET-28空質粒均用EcoR I和Hind III進行雙酶切，反應條件是37℃放置8h；反應結束后將酶切產物再次用DNA純化試劑盒進行純化，并將純化后的DNA片段和pET-28空質粒的片段用T4 DNA連接酶進行連接。
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