[發(fā)明專利]鐮刀菌病病原菌RT-PCR檢測(cè)引物和探針組合及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710061639.4
• 申請(qǐng)日: 2017-01-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106868114B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 龔杰;張?chǎng)?/a>;吳偉偉;陳見(jiàn)友;陸捷潔;韓娜;張婷婷;黎青山
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所
• 主分類號(hào): C12Q1/6851
• 分類號(hào): C12Q1/6851;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/77
• 代理公司: 11002 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王文君

1.含有鐮刀菌病病原菌RT-PCR檢測(cè)引物和探針組合的用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)鐮刀菌病病原菌的試劑盒，其特征在于，所述鐮刀菌病病原菌RT-PCR檢測(cè)引物和探針組合包括：

(I)用于檢測(cè)鐮刀菌的通用引物和探針，所述鐮刀菌包括茄病鐮刀菌、串珠鐮刀菌和尖孢鐮刀菌

Fpan-F：5′-GCCCGAGTTGTAATTTGTAGAG-3′

Fpan-R：5′-AACCAGACGGGGCTCTCAC-3′

Fpan-P：5′-FAM-GGTGCCTTCCGAGTTCCCTGG-BHQ1-3′

(II)用于檢測(cè)串珠鐮刀菌的特異性引物和探針

Fmon-F：5′-CGCATGAGTGTTTACTTCAACG-3′

Fmon-R：5′-AGGTCGACGAGGACGGCT-3′

Fmon-P：5′-FAM-AGCAGTCAA[T]G[T]CAAGAGTTCA-BHQ1-3′；

其中，[T]表示鎖核酸；

(III)用于檢測(cè)茄病鐮刀菌的特異性引物和探針

Fsol-F：5′-GCATGAGCGTCTACTTCAAC-3′

Fsol-R：5′-AAGGGACCAGCACGAACG-3′

Fsol-P：5′-FAM-AGCTGACATCTGTAGGCTTCTGGTAA-BHQ1-3′；以及

(IV)用于檢測(cè)尖孢鐮刀菌的特異性引物和探針

Foxy-F：5′-TGTCTACTTCAACGAGGTATGC-3′

Foxy-R：5′-CATGGTACCAGGCTCAAGAT-3′

Foxy-P：5′-FAM-AATTCCCAAGCTCACACAACTAGG-BHQ1-3′；

所述試劑盒還包括競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)參模板Fpan-IAC、Fmon-IAC、Fsol-IAC、Foxy-IAC和內(nèi)參探針Fu-IACP，其序列信息如下：

Fpan-IAC：5′-GCCCGAGTTGTAATTTGTAGAGCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGGTGAGAGCCCCGTCTGGTT-3′

Fmon-IAC：5′-CGCATGAGTGTTTACTTCAACGCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGAGCCGTCCTCGTCGACCT-3′

Fsol-IAC：5′-GCATGAGCGTCTACTTCAACCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGCGTTCGTGCTGGTCCCTT-3′

Foxy-IAC：5′-TGTCTACTTCAACGAGGTATGCCTAGATGACTGAGCACGTCTATCCGATGATCATGATCTTGAGCCTGGTACCATG-3′

Fu-IACP：5′-TAMRA-ACTGAGCACGTCTATCCGA-BHQ1-3′；

所述試劑盒還包括真菌DNA提取液和/或玻璃珠；

所述真菌DNA提取液的配方如下：

所述玻璃珠為直徑710-1180μm的酸洗玻璃珠。

2.用于非疾病診斷目的檢測(cè)鐮刀菌病病菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測(cè)樣品的DNA；

2)以上述提取的DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述試劑盒，分別進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增；

3)分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。