[發明專利]用于鑒定牛型結核分枝桿菌的SNP標記及其應用

在審

• 申請號: 201710060264.X
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN106868113A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 萬康林;紀凌云;蔣毅;劉海燦;李馬超
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

1.用于鑒定牛型結核分枝桿菌的SNP標記，其特征在于，所述SNP標記位于牛型結核分枝桿菌PstS基因上，其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，該序列第53位堿基C為SNP突變位點。

2.用于實時熒光定量PCR檢測權利要求1所述SNP標記的引物及探針，其特征在于，上游引物：5'-TTTCTGCACTGGGCGATCA-3'，下游引物：5'-CAACGCGTCAGACAACTTCAC-3'，探針：5'-FAM-ACCAGGCTCATTTC-MGB-3'。

3.含有權利要求2所述引物及探針的實時熒光定量PCR檢測試劑盒。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。

5.權利要求2所述引物及探針或權利要求3或4所述試劑盒在鑒定牛型結核分枝桿菌中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測樣品的DNA；

2)以上述提取的DNA為模板，利用所述引物及探針，進行實時熒光定量PCR擴增；

3)分析PCR擴增產物。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，步驟2)中實時熒光定量PCR擴增反應體系：2×Premix Ex Taq 10μl，上、下游引物及探針的終濃度為250nmol/L，DNA模板2μl，去離子水加至總量為20μl；

實時熒光定量PCR擴增程序：95℃預變性10min；95℃變性15s，59.3℃退火60s，共40個循環。

8.根據權利要求6或7所述的應用，其特征在于，步驟3)根據是否出現擴增曲線，分析是否含有牛型結核分枝桿菌；含有牛型結核分枝桿菌的待測樣品會出現擴增曲線，表現為陽性結果；不含有牛型結核分枝桿菌的待測樣品不出現擴增曲線，表現為陰性結果。