[發(fā)明專利]一種重組蛋白及藥物組合物與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710059842.8
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN106632694B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發(fā)明（設計）人: 李建強;葛君;陳思;陸鳳;任蘇林;周童;戚鳳春;趙志強;劉俊林;殷相平;蒲秀英;徐繼英;王建鋒;焦文強
• 申請（專利權）人: 南京益康生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

本發(fā)明涉及領域生物醫(yī)藥，特別涉及一種重組蛋白及藥物組合物與應用。本發(fā)明所述重組蛋白包括人乳頭瘤病毒E6和E7變形體的融合多肽具有特異的氨基酸序列，特異的空間結構，因此，具有強免疫原性，尤其是細胞免疫，且通過點突變解決了人體安全性問題。本發(fā)明所述藥物組合物包括所述重組蛋白和佐劑能激發(fā)和強化針對人乳頭瘤病毒E6、E7蛋白的特異性T細胞免疫應答，有效的治療宮頸癌，具有良好的應用前景。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，特別涉及一種重組蛋白及藥物組合物與應用。

背景技術

子宮頸癌是一種嚴重危害女性健康的惡性腫瘤，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中排名第二，僅次于乳腺癌。全世界約26.45億的女性(大于15歲)面臨宮頸癌的風險，每年53萬例宮頸癌新發(fā)病例，占所有女性腫瘤的12％，死亡病例達26.5萬例。中國約有5.52億大于15歲的女性面臨發(fā)展為宮頸癌的風險，最新統(tǒng)計顯示，中國每年有61691名女性診斷為宮頸癌，其中29526名死亡，感染HPV16/18型的病例中，只有3.8％在一定時間顯示正常的細胞學特點，76.1％發(fā)展為侵潤性宮頸癌。

已知子宮頸癌主要由人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起。70％以上HPV陽性的宮頸癌病變中存在HPV基因組的整合，其中以HPV16型和HPVl8型為主，其中約60％的宮頸癌與HPV16感染相關，約10％的宮頸癌與HPV18相關。對HPV的致癌機理研究顯示：E6和E7基因是致癌型HPV的主要轉化基因,兩者共同具有鋅指結構域的特征(zinc-binding structures)。HPVE6、E7蛋白分別可以與抑癌蛋白p53和pRb相結合，引起p53降解與pRb功能性滅活,這是HPVE6、E7癌蛋白干擾細胞周期負調控功能的主要機制，能導致上皮細胞永生化，細胞生長、增殖失控，細胞凋亡異常。因此，在HPV中E6和E7蛋白對宮頸癌的發(fā)病起主要作用，從而成為制備用于治療和預防宮頸癌疫苗的主要靶抗原。

宮頸癌的傳統(tǒng)治療方法如手術、放療、化療等只對早期患者有一定的療效，且治療創(chuàng)傷大，不能防止HPV再度感染。研究顯示，對于由病毒引起的腫瘤和傳染性疾病，免疫療法是一種有效的方法。重組蛋白疫苗純度高安全性好，但其免疫原性低，蛋白更傾向于刺激體液免疫，不能誘導強的細胞免疫。研究還表明，單獨使用原核表達的HPV E6或E7蛋白作為治療性疫苗有一定的防治效果，但使用野生型的E6或E7蛋白作為治療藥物，由于其治療效果不顯著而無應用價值，且由于是未經改造的野生型癌基因產物，具有腫瘤轉化活性，安全性受到人們的質疑。含有E6和E7基因的病毒，或以質粒為載體的DNA疫苗，由于可能整合到細胞基因組中，也存在安全性問題。用合成的多肽作為疫苗，其免疫原性低且受MHC限制，使用范圍有限。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種重組蛋白及藥物組合物以應用，以有效解決現(xiàn)在技術中重組蛋白疫苗免疫免疫原性低、不能誘導強的細胞免疫以及安全性問題等技術缺陷。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

一種重組蛋白，包括人乳頭瘤病毒E6和E7變形體的融合多肽；所述人乳頭瘤病毒為16型和/或18型。

優(yōu)選的，所述人乳頭瘤病毒16型E6和E7變形體的融合多肽的氨基酸序列排列依次為HPV16型E6蛋白N端第1-83位氨基酸序列、HPV16型E7蛋白N端的第1-62位氨基酸序列、HPV16型E6蛋白C端的第69-151位氨基酸序列、HPV16型E7蛋白C端的第48-98位氨基酸序列，其中HPV16型E6的突變位點為F47R、L50G、C63G、C106R；HPV16 E7的突變位點為Y23G、C24G、Y25G、C58G、C91G；