[發明專利]一種從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法及利用牛血的方法

有效

• 申請號: 201710059284.5
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN106749626B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 賈芳苗;劉冬;鄧飛
• 申請（專利權）人: 西藏森威醫療科技有限公司;成都遠睿生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/47;C07K1/14;C07K1/30
• 代理公司: 北京超成律師事務所 11646
• 代理人: 高榮英

1.一種從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法，其特征在于，其包括：

取牛血清，離心得第一上清液，向所述第一上清液中加入0.8-1.2倍于所述第一上清液體積的4-6mM的pH為7.0-7.4的PBS；攪拌下加入(NH₄)₂SO₄至48％-52％飽和度；經冷藏、靜置后抽濾得第一濾液和第一沉淀；

從所述第一濾液中提取白蛋白；

從所述第一沉淀中提取球蛋白；

從所述第一沉淀中提取所述球蛋白包括：

溶解所述第一沉淀，加入(NH₄)₂SO₄至30％-35％飽和度，并調節pH至6.5-7.0，經攪拌、靜置離心后得第三沉淀；

溶解所述第三沉淀，加入(NH₄)₂SO₄至30％-35％飽和度，經攪拌、靜置離心后得第四沉淀；

溶解所述第四沉淀，加入(NH₄)₂SO₄至18％-22％飽和度，經攪拌、靜置離心后得第三上清液；

往所述第三上清液中加入(NH₄)₂SO₄至30％-35％飽和度，經攪拌、靜置離心后得第五沉淀；

溶解所述第五沉淀得到粗球蛋白溶液，所述粗球蛋白溶液經脫鹽處理并冷凍干燥后得到所述球蛋白；

從所述第一濾液中提取所述白蛋白包括：

向所述第一濾液加入保護劑并加熱至變性溫度，使雜蛋白變性；抽濾得第二濾液；

往所述第二濾液中加入(NH₄)₂SO₄至60％-64％飽和度，并調節pH至4.4-4.8，靜置離心得第二沉淀；

溶解所述第二沉淀，透析后離心得到第二上清液，透析濃縮所述第二上清液得到濃縮液；

所述濃縮液經脫鹽處理，得到白蛋白溶液，所述白蛋白溶液經冷凍干燥得到所述白蛋白。

2.根據權利要求1所述的從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法，其特征在于，所述變性溫度為55-65℃。

3.根據權利要求2所述的從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法，其特征在于，加熱至所述變性溫度后，維持所述變性溫度，繼續加熱20-40min。

4.根據權利要求1所述的從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法，其特征在于，所述保護劑為辛酸鈉，所述辛酸鈉在所述第一濾液中的終濃度m:v為0.15％-0.19％。

5.根據權利要求1所述的從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法，其特征在于，所述脫鹽處理為：將所述濃縮液經過Sephadex G-50柱脫鹽。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法，其特征在于，所述(NH₄)₂SO₄均為(NH₄)₂SO₄飽和溶液。

7.一種利用牛血的方法，其特征在于，其包括：

從牛血中分離出牛血清；

按照權利要求1-6中任一項所述的從牛血清中提取白蛋白和球蛋白的方法從所述牛血清中提取牛血清白蛋白以及牛血清球蛋白。

8.根據權利要求7所述的利用牛血的方法，其特征在于，從所述牛血中分離出所述牛血清的步驟包括：將所述牛血于35-38℃下，保溫靜置2-4h，2-8℃冷藏12-16h，吸取上層析出的黃色液體，得到所述牛血清。