[發(fā)明專利]一種與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710059164.5
• 申請(qǐng)日: 2017-01-24
• 公開（公告）號(hào): CN106754909B
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李和剛;程明;張婉瑩;楊培培;張寶珣;李培培;郝小靜;侯樂樂;包漢勛;劉開東;孟德坤;房志遠(yuǎn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島市畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/6888
• 代理公司: 青島中天匯智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37241
• 代理人: 萬桂斌

1.一種與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：

上述序列142位突變位點(diǎn)的R是A或G，該突變導(dǎo)致BglⅡ-RFLP多態(tài)性。

2.一種檢測(cè)與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的基因片段突變的引物對(duì)，其特征在于，其DNA序列如下所示：

正向引物SPARCF4:CGAGGACAACAACCTCCTGAC

反向引物SPARCR4:CTAGGAGCCTCCAAAGGCCG。

3.權(quán)利要求1所述的與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.以山羊SPARC基因序列為模板，設(shè)計(jì)引物對(duì)SPARCF4、SPARCR4，其DNA序列如SEQ IDNO.2-3所示；

S2.構(gòu)建PCR反應(yīng)體系，以奶山羊基因組DNA為模板利用S1所得引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

S3.步驟S2所得PCR產(chǎn)物測(cè)序，測(cè)序序列與山羊SPARC基因比對(duì)，獲得與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

4.如權(quán)利要求3所述的與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述PCR反應(yīng)體系為：1μL的50ng/μL的奶山羊外周血基因組DNA，12.5μL的2×PCRMix，0.75μL10mM的正向引物SPARCF4,0.75μL10mM的反向引物SPARCR4,10μL的ddH₂O。

5.如權(quán)利要求3或4所述的與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述PCR擴(kuò)增條件為：95℃5min；94℃30s，60℃30s，72℃30s，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

6.如權(quán)利要求3所述的與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述奶山羊基因組DNA為隨機(jī)選取奶山羊群體2個(gè)及以上個(gè)體基因組DNA，等量混合所得。

7.如權(quán)利要求3或6所述的與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記的制備方法，其特征在于，步驟S2中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)BglⅡ酶切后產(chǎn)生142bp和101bp兩條帶，說明該個(gè)體SPARC兩個(gè)等位基因142位突變位點(diǎn)均為A，判定為AA基因型；PCR產(chǎn)物經(jīng)BglⅡ酶切后產(chǎn)生243bp、142bp和101bp三條帶，說明該個(gè)體SPARC兩個(gè)等位基因142位突變位點(diǎn)分別為A和G，判定為AG基因型。

8.權(quán)利要求1所述的與奶山羊乳脂率性狀相關(guān)的分子標(biāo)記在奶山羊乳脂率分子標(biāo)記輔助選育中的應(yīng)用，其特征在于，序列142位是AA基因型的乳脂率高于AG基因型。

9.權(quán)利要求2所述的引物對(duì)在奶山羊乳脂率分子標(biāo)記輔助選育中的應(yīng)用。