[發明專利]一種茯苓菌絲體液體發酵方法

有效

• 申請號: 201710058472.6
• 申請日: 2017-01-23
• 公開（公告）號: CN106754428B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 胡學博;李嘉偉
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 武漢臻誠專利代理事務所(普通合伙) 42233
• 代理人: 仲暉

本發明公開了一種茯苓菌絲體液體發酵方法，包括以下步驟：擴大培養階段，在28℃至30℃下茯苓菌絲體液體發酵體系，培養5至7天，每天用采用高溫或低溫處理所述茯苓菌絲體液體發酵體系1至3小時。本發明由于模擬茯苓野外生長環境，進行高低溫發酵培養，實現了茯苓胞內三萜含量的高水平積累，能夠在無需添加任何外源物質的前提下，廉價、安全、易操作，可顯著提高胞內茯苓三萜含量，從而為工業化生產茯苓三萜奠定基礎。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，涉及一種茯苓菌絲體液體發酵方法。

背景技術

茯苓有著極高的藥用價值，其有效成分：包括β-茯苓聚糖(β-Pachyman)即茯苓多糖、茯苓糖和三萜類化合物茯苓酸(Tumulasie acid)、松苓酸(Pmicoic acid)。目前茯苓有效成分的獲取，仍然主要依靠茯苓人工培植和野生采集。由于茯苓生長周期較長，產量小，因此難以大量生產。

而目前對茯苓菌絲體液體發酵方法，主要集中在茯苓多糖、茯苓糖的生產。對菌絲體發酵產物藥用成分，如茯苓多糖等的提取、純化、檢測，及其藥理學作用的研究報道較多，這些工作為研究茯苓酸生物合成的調控機制提供了很好的材料和表型。但是這些茯苓菌絲體發酵工藝對于提高茯苓三萜含量及產量，沒有明顯作用。

但對于茯苓液體發酵條件，尤其是培養溫度進行細化研究的報道幾乎沒有。同時考慮到茯苓作為一種藥食同源類中藥，如果想要促進其在醫學界廣泛使用的話，必須考慮到發酵的安全性和經濟性。因此，有必要開發效果更加理想的發酵方法和條件，提高茯苓在菌絲體階段三萜類化合物產量。

發明內容

針對現有技術的以上缺陷或改進需求，本發明提供了一種茯苓菌絲發酵方法體的，其目的在于通過模擬野外的溫度變化，刺激誘導茯苓合成茯苓三萜，提高茯苓三萜累化合物的產量，由此解決現有技術茯苓三萜產量較低，無法規模化生產的技術問題。

為實現上述目的，按照本發明的一個方面，提供了一種茯苓菌絲體液體發酵方法，其特征在于，包括種子培養階段和擴大培養階段；

所述擴大培養階段，在28℃至30℃下茯苓菌絲體液體發酵體系，培養5至7天，每天用采用高溫或低溫處理所述茯苓菌絲體液體發酵體系1至3小時。

優選地，所述茯苓菌絲體液體發酵方法，其所述高溫在32℃至36℃之間；所述低溫在0℃至8℃之間。

優選地，所述茯苓菌絲體液體發酵方法，其每天采用高溫或低溫處理茯苓菌絲體發酵體系2小時。

優選地，所述茯苓菌絲體液體發酵方法，其所述茯苓菌絲提液體發酵體系擴大培養階段培養基為CYM培養基。

優選地，所述茯苓菌絲體液體發酵方法，其種子液培養階段采用多級種子發酵培養。

優選地，所述茯苓菌絲體液體發酵方法，其所述種子液培養階段具體步驟如下：

(1)采用PDA液體培養基活化茯苓菌絲體，28℃至30℃，搖床轉速120-150r/min培養5至7天，獲得一級種子液；

(2)將步驟(1)中獲得的一級種子液按照接種量體積比1:5，接種于第一茯苓種子培養基中，28℃至30℃，搖床轉速120-150r/min培養5天，獲得二級種子液；

(3)將步驟(2)中獲得的二級種子液按照接種量體積比1:10，接種于第二茯苓種子培養基中，28℃至30℃，搖床轉速120-150r/min培養2天，獲得三級種子液；

(4)將步驟(3)中獲得的三級種子液按照接種量體積比1:10，接種于CYM培養基中，28℃至30℃，搖床轉速120-150r/min培養1天，獲得所述茯苓菌絲體液體發酵體系。

優選地，所述茯苓菌絲體液體發酵方法，其每升所述PDA液體培養基含有葡萄糖20g以及土豆汁200g。