[發明專利]一種燕麥花葉病毒的RT?PCR檢測方法、引物和試劑盒

在審

• 申請號: 201710056939.3
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN107058616A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 張衛東;黃永輝;權永兵;廖力;徐淼鋒;遲遠麗
• 申請（專利權）人: 珠海出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司44205
• 代理人: 李先林

1.一種用于燕麥花葉病毒的RT-PCR檢測的引物，包括上游引物OMV-F2、下游引物OMV-R2，其序列分別如下：

OMV-F2：5′-CCTCGGATGGTGCGTCAATA-3′；

OMV-R2：5′-AACCCTGTGGTGGGTTGTTT-3′。

2.一種燕麥花葉病毒的RT-PCR檢測方法，其特征在于，包括使用權利要求1所述引物進行PCR擴增的步驟。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、取待測樣品提取植物組織總RNA；

S2、以總RNA為模板，引入下游引物OMV-R2進行反轉錄模板cDNA的合成；

S3、將上游引物OMV-F2、下游引物OMV-R2置于PCR儀中進行PCR擴增反應；

S4、對擴增產物進行電泳分離，鑒定樣品中是否含有燕麥花葉病毒。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟S2中進行反轉錄模板cDNA的合成時，其反應體系為：

總RNA1μL

5×PCR緩沖液 2.5μL

dNTP 0.5μL

下游引物OMV-R2 2μL

反轉錄酶 0.5μL

加ddH₂O至總體系12.5μL；

反應條件為：37℃保溫60min，70℃ 15 min滅活反轉錄酶。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述dNTP的濃度為10mmol/L，所述下游引物OMV-R2的濃度為10μmol/L。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟S3中PCR反應體系為：

10×PCR緩沖液2.5μL

MgCl₂2.5μL

上游引物OMV-F2 1μL

下游引物OMV-R2 1μL

模板cDNA 1μL

Taq酶0.5μL

加ddH₂O補足到25μL；

反應條件為：95℃ 5min；95℃ 1min，60℃ 50s，72℃ 60s，35個循環；72℃ 10min。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述上游引物OMV-F2和下游引物OMV-R2的濃度均為10μmol/L。

8.一種燕麥花葉病毒的RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1所述的引物。