[發(fā)明專利]用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測SOCS6的檢測試劑及其試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710056694.4
• 申請日: 2017-01-25
• 公開（公告）號: CN106841615A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁東波;蘇嘉明;王蔚;張偉;朱建國
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州省人民醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標(biāo)事務(wù)有限公司52002
• 代理人: 袁慶云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體來說涉及的是一種用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測SOCS6的檢測試劑，同時(shí)還涉及該用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷SOCS6的檢測試劑盒。

背景技術(shù)

前列腺癌是老年男性最常見的泌尿系惡性腫瘤，近年來中國的前列腺癌發(fā)病率呈顯著上升的趨勢。前列腺癌的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過程，受人體內(nèi)在因素、行為因素、分子與環(huán)境等諸多因素的影響，最終形成前列腺癌。根治性前列腺切除術(shù)是目前治療局限性前列腺癌最有效的方法之一，但根治術(shù)后10年內(nèi)生化復(fù)發(fā)率可達(dá)17—53%，而生化復(fù)發(fā)是腫瘤繼續(xù)進(jìn)展并發(fā)生臨床復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的前兆，是提示前列腺癌復(fù)發(fā)的早期重要依據(jù)之一。

前列腺癌根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)確診時(shí)包括PSA水平、術(shù)前Gleason評分、術(shù)后病理分期、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響其復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。當(dāng)前的臨床工作中主要以前列腺特異抗原（PSA）作為前列腺癌根治術(shù)后生化復(fù)發(fā)的主要檢測指標(biāo)。然而，作為前列腺癌的診斷指標(biāo)，盡管PSA的敏感性較強(qiáng)，但其特異性不足，研究顯示前列腺增生、前列腺炎、急性尿潴留等多種疾病均可引起血漿中PSA增多。因此，開發(fā)敏感性高、特異性強(qiáng)、結(jié)果穩(wěn)定的腫瘤標(biāo)記物是前列腺癌的診斷工作的重點(diǎn)研究方向。

干細(xì)胞因子受體（KIT）是將胞外信號傳遞到胞內(nèi)的重要樞紐，它通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化，許多細(xì)胞的癌變正是因?yàn)镵IT的過度表達(dá)從而激活了原癌基因的表達(dá)，導(dǎo)致了細(xì)胞的無限增殖。

SOCS6是細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子（SOCS）家族蛋白成員之一，與其他SOCS家族成員不同，SOCS6主要涉及受體酪氨酸激酶信號的負(fù)調(diào)節(jié)并涉及細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化和凋亡的調(diào)節(jié)，在生物體內(nèi)還能抑制KIT介導(dǎo)的信號通路。SOCS-6通過與干細(xì)胞因子受體(KIT)相互作用，SOCS6-蛋白上的SH2結(jié)構(gòu)域直接結(jié)合人干細(xì)胞因子受體的第567個(gè)酪氨酸上，負(fù)反饋調(diào)節(jié)KIT受體介導(dǎo)的信號通路，從而抑制KlT的活化，進(jìn)而抑制原癌基因的表達(dá)。關(guān)于SOCS6的研究顯示，其蛋白表達(dá)水平是細(xì)胞正常生長的重要因素，這些研究表明，SOCS6在許多案例中是一個(gè)生存信號的負(fù)性調(diào)節(jié)器。

研究顯示SOCS6 的含量在多種腫瘤組織中出現(xiàn)明顯下降，尤其是 SOCS6表達(dá)水平跟前列腺癌患者的預(yù)后存在密切的聯(lián)系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能檢測SOCS6在前列腺癌的表達(dá)狀態(tài)的用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測SOCS6的檢測試劑。

本發(fā)明的另一目的在于提供該用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測SOCS6的檢測試劑盒。

本發(fā)明的一種用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測SOCS6的檢測試劑，其試劑組成如下：

內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑50ul、動物非免疫血清（羊）50ul 、一抗為鼠源抗SOCS6多克隆抗體1ul、磷酸緩沖鹽溶液（PBS緩沖液）50ul，二抗為生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG 50ul、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶50ul、 DAB顯色試劑 100ul 。

本發(fā)明的一種用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測SOCS6的檢測試劑盒，包含檢測SOCS6表達(dá)狀態(tài)的檢測試劑組成如下：

內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑50ul 、動物非免疫血清（羊）50ul（、一抗為鼠源抗SOCS6多克隆抗體 1ul、二抗為生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG50ul 、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶50ul、 DAB顯色試劑 100ul 。

本試劑盒使用方法如下：

（1）組織切片后，放在62度左右的烘箱中烤大約2h

（2）組織脫蠟：TO型生物制片透明劑Ⅰ（二甲苯）15min

TO型生物制片透明劑Ⅱ（二甲苯）15min

梯度酒精各2min：100%乙醇，100%乙醇，95%酒精，

95%酒精，90%酒精，80%酒精，70%酒精

（3）用蒸餾水沖洗一下，枸櫞酸鹽抗原修復(fù)液修復(fù)，高火3min，高火3min，中火3min，中火3min，冷卻至室溫；

（4）用阻水筆把組織圈住，PBS泡15min

（5）每張切片加1滴或50ul過氧化酶阻斷溶液，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，室溫下孵育15分鐘。

（6）用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）（PH7.4）沖洗3次，每次3min ；

（7）甩去PBS液，每張切片加50ul動物非免疫血清（羊），溫室下孵育20-30min；