[發(fā)明專利]用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測(cè)SOCS6的檢測(cè)試劑及其試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710056694.4
• 申請(qǐng)日: 2017-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN106841615A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁東波;蘇嘉明;王蔚;張偉;朱建國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州省人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574
• 代理公司: 貴陽(yáng)東圣專利商標(biāo)事務(wù)有限公司52002
• 代理人: 袁慶云

1.一種用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測(cè)SOCS6的檢測(cè)試劑，其試劑組成如下：內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑50ul、動(dòng)物非免疫血清（羊）50ul 、一抗為鼠源抗SOCS6多克隆抗體1ul、磷酸緩沖鹽溶液（PBS緩沖液）50ul，二抗為生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG 50ul、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶50ul、 DAB顯色試劑 100ul 。

2.一種用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測(cè)SOCS6的檢測(cè)試劑盒，包含檢測(cè)SOCS6表達(dá)狀態(tài)的檢測(cè)試劑組成如下：內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑50ul 、動(dòng)物非免疫血清（羊）50ul（、一抗為鼠源抗SOCS6多克隆抗體 1ul、二抗為生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG50ul 、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶50ul、 DAB顯色試劑 100ul 。

3.如權(quán)利要求2所述的用于前列腺癌進(jìn)展及預(yù)后診斷檢測(cè)SOCS6的檢測(cè)試劑盒，使用方法如下：

（1）組織切片后，放在62度左右的烘箱中烤大約2h

（2）組織脫蠟：TO型生物制片透明劑Ⅰ（二甲苯）15min

TO型生物制片透明劑Ⅱ（二甲苯）15min

梯度酒精各2min：100%乙醇，100%乙醇，95%酒精，

95%酒精，90%酒精，80%酒精，70%酒精

（3）用蒸餾水沖洗一下，枸櫞酸鹽抗原修復(fù)液修復(fù)，高火3min，高火3min，中火3min，中火3min，冷卻至室溫；

（4）用阻水筆把組織圈住，PBS泡15min

（5）每張切片加1滴或50ul過(guò)氧化酶阻斷溶液，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，室溫下孵育15分鐘；

（6）用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）（PH7.4）沖洗3次，每次3min ；

（7）甩去PBS液，每張切片加50ul動(dòng)物非免疫血清（羊），溫室下孵育20-30min；

（8）甩去血清，每張切片加50ul稀釋好（第一抗體：PBS緩沖液=1:50）的第一抗體，室溫下孵育1h或4℃、16h,；

（9）PBS沖洗3次，每次,10min，先沖后搖；

（10）甩去PBS液，每張切片滴加50ul第二抗體，室溫下孵育30min；

（11）PBS沖洗3次，每次3min ；

（12）甩去PBS液，每張切片滴加50ul鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶，室溫下孵育15min,；

（13）PBS沖洗3次，每次3min；

（14）甩去PBS液，每張切片滴,2滴或100ul新鮮配制的二氨基聯(lián)苯胺（Diaminobenzidine,DAB）顯色液，顯微鏡下觀察3-10min；

（15）自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染4min，0.1%HCL分化蘸一下約5秒，自來(lái)水沖洗10min反藍(lán)；

（16）組織脫水：70%酒精，80%酒精，90%酒精，100%乙醇，100%乙醇各2min，干燥

（17）放在二甲苯（TO）中泡5min，中性樹膠封片；

（18）免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果判斷結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：Leica熒光顯微鏡下，每張切片隨機(jī)選取五個(gè)高倍鏡視野觀察細(xì)胞，細(xì)胞的基底膜出現(xiàn)棕黃或棕褐色為陽(yáng)性；根據(jù)細(xì)胞的陽(yáng)性基底膜在總細(xì)胞中所占數(shù)量比例判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，按染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；然后按陽(yáng)性細(xì)胞率評(píng)分：腫瘤細(xì)胞無(wú)陽(yáng)性染色者為0分，陽(yáng)性細(xì)胞率≤10％為1分，11％～50％為2分，51％～75％為3分，＞75％為4分. 兩者積分的乘積作為染色結(jié)果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：0定為-，陰性；1～4分為+，弱陽(yáng)性；5～8分為++，陽(yáng)性；9～12分為+++，強(qiáng)陽(yáng)性。