[發明專利]一種sgRNA及其構建的慢病毒載體和應用在審
| 申請號： | 201710054835.9 | 申請日： | 2017-01-24 |
| 公開（公告）號： | CN106801056A | 公開（公告）日： | 2017-06-06 |
| 發明（設計）人： | 姚永超;陳小平;余松林;肖宏奎;李姣姣;秦莉;趙思婷 | 申請（專利權）人： | 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/66;C12N7/01;A61K48/00;A61P31/18 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司11332 | 代理人： | 鞏克棟,侯桂麗 |
| 地址： | 510663 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 sgrna 及其 構建 病毒 載體 應用 | ||
1.一種sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。
2.根據權利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的啟動子為U6啟動子。
3.一種SIV-CRISP/cas9慢病毒載體，其特征在于，所述慢病毒載體包含如權利要求1或2所述的sgRNA的核酸序列。
4.一種如權利要求3所述的SIV-CRISP/Spcas9慢病毒載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)使用HpaI和ClaI雙酶切pCL20cSLFR MSCV-GFP載體，得到酶切后的載體；
(2)PCR擴增U6啟動子-sgRNA-EFS啟動子-Cas9序列，通過末端重組的方式克隆到步驟(1)酶切后的載體上，得到所述SIV-CRISP/Spcas9慢病毒載體。
5.根據權利要求4所述的方法，步驟(2)所述的PCR擴增的引物的核酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。
6.一種重組慢病毒，其特征在于，將包含如權利要求3所述的SIV-CRISP/cas9慢病毒載體與包裝輔助質粒pCAG4-RTR-SIV、pCAG-SIVgprre和pCAG-VSVG共轉染哺乳細胞得到的重組慢病毒。
7.根據權利要求6所述的重組慢病毒，其特征在于，所述哺乳細胞為HEK293T細胞。
8.一種如權利要求3所述的SIV-CRISP/cas9慢病毒載體用于敲除CXCR4和/或CCR5基因。
9.一種組合物，其特征在于，所述組合物包括如權利要求3所述的慢病毒載體和/或如權利要求6所述的重組慢病毒。
10.如權利要求3所述的慢病毒載體、如權利要求6所述的重組慢病毒或如權利要求9所述的組合物在制備抗艾滋病藥物中的應用。
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