[發明專利]一種乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201710053846.5
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106872455A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 馬建民;孫健;付靜濤
• 申請（專利權）人: 北京農業職業學院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/82
• 代理公司: 北京市京大律師事務所11321
• 代理人: 劉向輝,王凝

技術領域

本發明屬于畜產品質量檢測技術領域，具體涉及一種牛奶中蛋白和尿素的檢測方法。

背景技術

奶牛日糧能量和蛋白質平衡一直是反芻動物營養研究的熱點問題。若日糧配制不當，會造成日糧能氮不平衡的問題，而過量的營養不但增加了奶牛的代謝負擔和飼養成本，而且最終排放到環境中導致污染。根據我國的蛋白質新體系，馮仰廉提出“瘤胃能氮平衡”原理，來指導奶牛日糧的配制。通過檢測牛乳中的乳蛋白和乳尿素(MUN)，可以評價奶牛日糧是否滿足能氮平衡，其判斷標準見表1。

表1利用不同乳蛋白和MUN水平評價日糧中蛋白質和能量水平

奶牛生產上，及時、經常檢測乳蛋白和乳尿素含量，是推廣奶牛能氮平衡理論指導改進奶牛日糧配方的必要條件之一。牛乳中蛋白質的檢測方法有：考馬斯亮藍方法、凱氏定氮方法、乳成分快速檢測儀分析法等；牛乳中的尿素檢測方法有：紫外一可見分光光度計法、近紅外光譜法、乳成分快速檢測儀分析法等，均需要精密分析儀器和相應的技術人員。目前牛場即沒有相關儀器，也缺乏相應的技術人員。

因此，需要研究一種簡便、易行、成本低廉的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，對牛場工作人員進行簡單的培訓即可準確分析出乳中蛋白和尿素的含量。

中國專利CN201510172395.8公開了一種牛奶蛋白的檢測方法，建立對比值(沉淀質量：牛奶體積)法檢測牛奶蛋白含量的方法，發現影響牛奶蛋白含量的測定方法包括牛奶的靜置時間、離心時間、離心轉速、冰乙酸濃度等因素，獲得了沉淀牛奶蛋白的最佳參數，即靜置9min、離心7min、離心12000r/min、冰乙酸濃度為0.3mol/L。對牛奶蛋白含量與比值的相關性數據進行偏最小二乘法分析，獲得牛奶蛋白含量X與比值Y的回歸線性方程：Y＝0.0645X+0.0581，R²＝0.9896，在2.0-4.0g/100mL范圍內時，牛奶蛋白含量X與比值Y之間存在較強的線性相關。但該專利存在以下缺點：(1)該方法測定鮮奶的乳蛋白含量時誤差偏大，原因是鮮奶是未經加工過的原料乳，鮮奶乳脂肪球的直徑比均質后的牛奶的乳脂肪直徑大得多，鮮奶乳脂肪球易浮于離心液上部，導致沉淀質量減小，從而導致測定結果偏低。(2)該方法不能同時測定乳尿素含量。(3)該方法需要使用離心機，天平等設備，不便牛場推廣。

中國專利201410830036.2公開了一種尿素快速檢測試劑盒，其包括試劑I、試劑II、試劑III和試劑IV，其中：試劑I包括EDTA二鈉和海藻糖；試劑II為脲酶；試劑III包括無水檸檬酸、水楊酸鈉和硝普鈉；試劑IV包括氫氧化鋰、二氯異氰尿酸鈉和無水硫酸鈉。本發明的試劑盒和檢測方法能夠有效屏蔽游泳池水中的銅離子和余氯對檢測結果的干擾，量程為0.5-8.0mg/L，測試時間約20min，試劑在室溫下保質期長，準確率高、特異性強、穩定性好，方便快捷，適用于游泳池的現場快速檢測，測試結果與國標檢測方法相近，因此該試劑盒具有良好的應用前景。但該專利存在以下缺點：(1)該方法不能測定蛋白質含量。(2)該方法用于游泳池水樣本檢測，需要掩蔽銅離子和余氯，牛奶樣本中尿素檢測需要掩蔽的主要離子為鈣離子。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，該方法設備簡單便宜，檢測方便，特別適合在牛場推廣。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

(1)乳蛋白的測定：取濃縮瓶，精密量取乳汁0.6-1.0毫升，加入3-5mL沉淀劑1，混勻搖勻，然后加入3-5mL沉淀劑2，蓋上蓋子，上下混勻。靜止12-24小時，觀察沉淀體積，沉淀體積與乳蛋白含量成正比。沉淀體積與沉淀劑用量相關。

(2)建立線性方程：取濃縮瓶5個，分別精密量取蛋白濃度為2.6，2.8，3.0，3.2，3.4g/100mL標準乳樣0.6-1.0毫升，加入3-5mL沉淀劑1，搖勻，然后加入3-5mL沉淀劑2，蓋上蓋子，上下混勻，靜止12-24小時，讀取沉淀體積，以沉淀體積為縱坐標(mL)，以蛋白濃度為橫坐標(g/100mL)，得線性標準曲線，其方程可以表示為：

y＝ax+b，其中x為蛋白質濃度，以g/100mL計，其中y為沉淀體積，以mL計，其中a，b為常數，跟沉淀劑濃度有關。

其中步驟(1)中沉淀劑1的制備方法如下：稱取2.12g亞鐵氰化鉀，用超純水溶解并定容至100mL。

其中步驟(1)中沉淀劑2的制備方法如下：稱取4.38g乙酸鋅，用超純水溶解并定容至100mL。