[發明專利]一種乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201710053846.5
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106872455A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 馬建民;孫健;付靜濤
• 申請（專利權）人: 北京農業職業學院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/82
• 代理公司: 北京市京大律師事務所11321
• 代理人: 劉向輝,王凝

1.一種乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)乳蛋白的測定：取濃縮瓶，精密量取乳汁0.6-1.0毫升，加入3-5mL沉淀劑1，混勻搖勻，然后加入3-5mL沉淀劑2，蓋上蓋子，上下混勻，靜止12-24小時，觀察沉淀體積，沉淀體積與乳蛋白含量成正比；

(2)建立線性方程：取濃縮瓶5個，分別精密量取蛋白濃度為2.6，2.8，3.0，3.2，3.4g/100mL標準乳樣0.6-1.0毫升，加入3-5mL沉淀劑1，搖勻，然后加入3-5mL沉淀劑2，蓋上蓋子，上下混勻，靜止12-24小時，讀取沉淀體積，以沉淀體積為縱坐標(mL)，以蛋白濃度為橫坐標(g/100mL)，得線性標準曲線，其方程可以表示為：

y＝ax+b，其中x為蛋白質濃度，以g/100mL計，其中y為沉淀體積，以mL計，其中a，b為常數；

將(1)中沉淀體積代入上述方程中，計算出待測乳汁中蛋白質的含量；

(3)乳尿素含量的測定：繼續在步驟(1)的濃縮瓶中加入酶液體2-5mL，反應20-30min，然后加入5-10mL顯色劑1和1-2mL顯色劑2，混勻，反應20min，由無色變成藍色，與標準比色卡比較顏色深淺，讀出尿素濃度。

2.根據權利要求1所述的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中沉淀劑1的制備方法如下：稱取2.12g亞鐵氰化鉀，用超純水溶解并定容至100mL。

3.根據權利要求1所述的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，其中步驟(1)中沉淀劑2的制備方法如下：稱取4.38g乙酸鋅，用超純水溶解并定容至100mL。

4.根據權利要求1所述的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，其中步驟(3)中酶液體的制備方法如下：稱取尿酶1g，用緩沖溶液溶解并定容至250mL；其中緩沖溶液的制備方法如下：稱取2.6g草酸溶于100ml超純水中，用2mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值為6.5。

5.根據權利要求1所述的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，其中步驟(3)中顯色劑1的制備方法如下：稱取2g水楊酸，亞硝基鐵氰化鈉0.1g，加入約10mL水，再加入2mol/L氫氧化鈉溶液5.5mL，攪拌使之完全溶解，再稱取2g酒石酸鉀鈉，溶于10ml水中，與上述溶液合并移入100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。

6.根據權利要求1所述的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，其中步驟(3)中顯色劑2的制備方法如下：量取含有效氯6％的次氯酸鈉溶液5mL，置100mL容量瓶中，用0.5％氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。

7.根據權利要求1所述的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中所述標準比色卡的制備方法如下：用標準乳樣和尿素配制尿素濃度分別為10mg/100mL、11mg/100mL、12mg/100mL、13mg/100mL、14mg/100mL、15mg/100mL、16mg/100mL、17mg/100mL、18mg/100mL的尿素標準乳樣；分別取各濃度的標準溶液0.6mL至濃縮瓶中，加入3mL沉淀劑1，搖勻，然后加入3mL沉淀劑2，蓋上蓋子，上下混勻，垂直靜止24小時；加入酶液2mL，反應20min；然后加入5mL顯色劑1和1mL顯色劑2，反應20min；反應完畢，獲得各濃度的尿素標準乳樣顯色時所呈現的標準色，根據得到的各標準色所列潘通色值采用電腦調色和印制，得到標準比色卡。

8.根據權利要求1所述的乳蛋白和乳尿素含量的檢測方法，其特征在于，(1)乳蛋白的測定：取25mL濃縮瓶，精密量取待測乳汁0.6mL，加入3mL沉淀劑1，搖勻，然后加入3mL入沉淀劑2，蓋上蓋子，上下混勻，垂直靜止24小時，讀取沉淀體積；

(2)建立線性方程：取25mL濃縮瓶5個，分別精密量取蛋白濃度為2.6，2.8，3.0，3.2，3.4g/100mL標準乳樣0.6mL，加入3mL沉淀劑1，搖勻，然后加入3mL沉淀劑2，迅速蓋上蓋子，上下混勻，靜止24小時，讀取沉淀體積，以沉淀體積為縱坐標(mL)，以蛋白濃度為橫坐標(g/100mL)，得線性標準曲線，y＝1.559x-1.391，R²＝0.997；其中x為蛋白質濃度，以g/100mL計，其中y為沉淀體積，以mL計，將(1)中沉淀體積代入上述方程中，計算出待測乳汁中蛋白質的含量；

(3)乳尿素含量的測定：繼續在(1)的濃縮瓶中加入酶液體2mL，反應20min，然后加入5mL顯色劑1和1mL顯色劑2，反應20min，與標準顯色卡比較，讀出待測乳汁中尿素含量。