[發明專利]一種接頭和通過高效率環化方式構建測序文庫的方法

在審

• 申請號: 201710053745.8
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN108342385A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 李洋;陳祖耕;王萍;廖小平
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C40B50/06
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

1.一種接頭，其特征在于，所述接頭為正義鏈和反義鏈形成的具有互補的突出末端的雙鏈核酸分子；其中，所述雙鏈核酸分子上含有生物素標記；

并且所述正義鏈的序列選自：SEQ ID NO：1；而所述反義鏈的序列選自下組：SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。

2.如權利要求1所述的接頭，其特征在于，所述雙鏈核酸分子中正義鏈的5’末端的核苷酸帶有磷酸基團。

3.如權利要求1或2所述的接頭，其特征在于，所述雙鏈核酸分子中反義鏈上含有生物素標記。

4.如權利要求1或2所述的接頭，其特征在于，所述的反義鏈為SEQ ID NO.:2。

5.一種如權利要求1所述的接頭的制備方法，其特征在于，包括：

(1)分別合成正義鏈和反義鏈核酸分子，其中至少一條鏈上含有生物素標記；和

(2)對所述正義鏈和反義鏈核酸分子進行混合后，先變性再退火，形成具有互補的突出末端的雙鏈核酸分子，即權利要求1所述的接頭。

6.一種通過環化方式構建DNA高通量測序文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提供權利要求1所述接頭；

(2)對待測生物的基因組DNA進行片段化處理，獲取片段化DNA；

(3)將(1)中接頭和(2)中片段化DNA相連，形成片段化DNA兩端帶有所述接頭的分子；

(4)對(3)中片段化DNA兩端帶有所述接頭的分子進行環化處理，使片段化DNA兩端的接頭的突出末端發生連接，從而形成環形DNA分子；

(5)對(4)中的所述環形DNA分子進行隨機打斷，形成片段混合物；

(6)從(5)中的所述片段混合物中，分離出帶有所述接頭的片段，從而構成所述的DNA高通量測序文庫。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中在片段化處理之后，還包括對片段化產物的純化及末端修飾步驟。

8.如權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)中環化處理通過控制濃度和時間，不增加DNA分子大小。

9.如權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)中片段混合物中DNA片段的長度為200～600bp。

10.如權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)中用帶有鏈酶親和素的磁珠篩選帶有接頭的片段。