[發(fā)明專利]一種基于間接競爭酶聯(lián)免疫法定量檢測油胺枝接聚琥珀酰亞胺高分子納米藥物載體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710051804.8
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106706894B
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張明翠;曹以婷
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽師范大學(xué)
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司34107
• 代理人: 任晨晨

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及納米材料的定量檢測，特別涉及一種基于間接競爭酶聯(lián)免疫法定量檢測油胺枝接聚琥珀酰亞胺(PSI_OAm)高分子納米藥物載體的方法。

背景技術(shù)

上世紀60年代，化學(xué)家們提出，可以將高分子材料應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，合成一種高分子藥物載體，用來改善藥物結(jié)構(gòu)，提高藥效。高分子藥物載體本身并不具備藥理作用，也不與藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，而是以適當(dāng)?shù)姆绞?氫鍵、離子鍵或絡(luò)合形式，主要為前者)與低分子藥物結(jié)合。高分子化合物僅作為低分子藥物的傳遞系統(tǒng)，真正發(fā)揮藥理作用的仍是低分子藥物。

高分子納米藥物載體是指具有納米尺度的高分子載體，實現(xiàn)對多肽分子、寡核苷酸、DNA、RNA和小分子化療藥物等多種藥物的攜載。藥物分子通過物理或化學(xué)的方式包載在納米材料載體上，形成藥物-載體的復(fù)合體系。從20世紀末開始，越來越多的研究人員開始關(guān)注和構(gòu)建用于藥物輸送的納米載體，并且這些納米藥物載體在腫瘤治療中展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。納米材料作為基因和藥物載體的納米學(xué)的出現(xiàn)，給癌癥治療注入了新的希望。

近10多年,各種聚合物納米載體被開發(fā)用于運載抗癌藥物和蛋白質(zhì),實現(xiàn)對腫瘤的高效低毒治療。盡管這些高分子納米藥物載體已步入臨床試驗階段，但對這些物質(zhì)的定量檢測卻鮮有報道，大部分已發(fā)表的期刊雜志關(guān)于高分子納米藥物載體的研究主要集中在以下幾個方面：納米載體的制備及表征、納米載體與抗癌藥物的偶聯(lián)、抗癌藥物在病灶部位的緩釋效率及藥效、納米載體及其藥物在生物體內(nèi)的分布、體外細胞毒性測試等。可見對于納米載體本身在生物體內(nèi)的定量檢測研究甚少。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供一種基于間接競爭酶聯(lián)免疫法定量檢測油胺枝接聚琥珀酰亞胺(PSI_OAm)高分子納米藥物載體的方法，利用了二抗放大了檢測信號，提高了實驗分析的靈敏度，即通過測量PSI_OAm包被抗原、PSI_OAm抗體即一抗與HRP標記的羊抗兔抗體即二抗，三者復(fù)合物的光學(xué)性號達到定量檢測PSI_OAm的目的，該方法快速、簡潔、檢測限低，可進行高通量測定。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種基于間接競爭酶聯(lián)免疫法定量檢測油胺接枝聚琥珀酰亞胺(PSI_OAm)高分子納米藥物載體的方法，所述方法包括以下步驟：

a、制備PSI_OAm包被抗原和免疫原；

b、制備PSI_OAm抗體：

c、將PSI_OAm包被抗原經(jīng)包被液稀釋后包被于酶標板中，封閉、加入不同濃度的PSI_OAm標準液，以PSI_OAm抗體作為一抗，HRP標記的羊抗兔抗體作為二抗，進行間接競爭酶聯(lián)免疫分析法；

d、以PSI_OAm標準液濃度的對數(shù)為橫坐標，吸光度值為縱坐標建立標準曲線，從而定量檢測出PSI_OAm的濃度。

所述標準曲線的線性方程為A＝1.256-0.148lgC，其中A為490nm處吸光度值，C為PSI_OAm濃度。其相關(guān)系數(shù)R²＝0.993，線性范圍為10^-2-10⁴，檢出限為0.03ng/mL

所述步驟a具體包括以下步驟：

a-1、水解PSI_OAm，得到水解后的PSI_OAm溶液；水解以使PSI_OAm中的羧基暴露出來，更好的連接大分子蛋白以制備PSI_OAm免疫原和PSI_OAm包被抗原；

a-2、向水解后的PSI_OAm溶液中，加入羥基琥珀酰亞胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺和牛血清白蛋白，20-30℃溫育3-6小時后，離心分離，取沉淀分散于pH＝7.4的PBS緩沖液中即得到PSI_OAm免疫原溶液；

a-3、向水解后的PSI_OAm溶液中，加入羥基琥珀酰亞胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺和雞卵清白蛋白，20-30℃溫育3-6小時后，離心分離，取沉淀分散于pH＝7.4的PBS緩沖液中即得到PSI_OAm包被抗原溶液；