[發明專利]一個聚合常用篩查靶標的轉基因油菜SD-rapeseed及其應用

有效

• 申請號: 201710049122.3
• 申請日: 2017-01-23
• 公開（公告）號: CN106834346B
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 武玉花;李俊;李允靜;曾新華;劉芳;吳剛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20;C12N15/10;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

本發明公開了一個聚合常用篩查靶標的轉基因油菜SD?rapeseed及其應用，涉及包括遺傳轉化及轉基因檢測在內的生物技術領域。在本發明中，通過農桿菌介導法將常用的11個轉基因篩查元件導入到常規油菜品種中雙6號中，獲得轉基因篩查油菜SD?rapeseed。插入11個轉基因篩查元件的融合序列如SEQ NO.1。以轉基因油菜SD?rapeseed作為原材料可以制備轉基因油菜篩查檢測通用基體標準物質及基因組DNA標準物質。本發明適用于轉基因油菜篩查檢測及篩查檢測標準物質的制備，克服了制備質粒標準物質容易污染環境的缺陷。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一個聚合常用篩查靶標的轉基因油菜SD-rapeseed及其應用，具體地說，是通過遺傳轉化獲得的聚合11個常用篩查靶標的轉基因油菜及其在轉基因標準物質制備和轉基因檢測中的應用。

背景技術

自轉基因作物大規模商業化以來，轉基因生物的安全性問題一直備受社會各界關注，為此，包括中國、歐盟、日本和韓國等在內的50多個國家和地區紛紛頒布實施轉基因生物安全管理法律法規；為了保護消費者的知情權，對轉基因產品紛紛實施標識制度，并規定了標識閾值。

轉基因標識制度的實施需要開發建立轉基因檢測方法，根據檢測特異性的不同，目前的檢測方法可分為篩查檢測方法、構建特異性檢測方法和轉化事件特異性檢測方法。其中，篩查檢測方法檢測的靶標是轉基因作物中最常見的通用元件，如CaMV35啟動子、NOS終止子等。因此，篩查檢測是轉基因檢測的第一步，檢測機構通常根據篩查檢測的結果，初步判定樣品中是否含有轉基因成分。

任何檢測工作的開展、檢測結果的質量控制和溯源都離不開標準物質。無論是目前在研的標準物質還是在售的標準物質，絕大部分都是基于轉化事件特異性檢測的需要研制的，沒有滿足轉基因篩查檢測需求的標準物質。在轉基因篩查檢測中，由于缺乏標準物質，只能利用混合的轉化事件特異性檢測用標準物質作為參照標準。但利用轉化事件特異性檢測用標準物質的混合物進行轉基因篩查存在多種問題：1)基因工程研究常用的潮霉素抗性基因HPT等轉基因元件沒有相應的標準物質；2)部分篩查元件在不同的轉化事件中重復出現，導致陽性對照不同元件拷貝數不一致，難以準確反映檢測的靈敏度；3)不同轉基因成分DNA提取效率存在差異，造成檢測靈敏度判斷的誤差。如果不用混合的轉基因材料作為陽性對照，需要根據檢測的靶標設置多個陽性對照，增大了提取DNA的工作量，而且為了考察DNA質量，還要多設置內標準基因的反應，進一步提高了檢測成本，增大了檢測的工作量，為檢測工作造成不便。

雖然用聚合檢測靶標的質粒作為標準物質可以解決缺乏通用篩查標準物質缺乏的難題，但質粒標準物質存在著容易污染檢測環境的問題。結合上述考慮，以解決缺乏轉基因篩查檢測用標準物質這一難題為切入點，將常用的轉基因篩查元件轉化到油菜中，創制轉基因油菜篩查檢測標準物質候選物，研制轉基因油菜篩查檢測基體標準物質或基因組DNA標準物質。與質粒標準物質相比，基因標準物質或基因組DNA標準物質沒有易于污染環境的缺陷。

經對現有專利和其他文獻的檢索，尚未發現任何關于轉基因油菜篩查檢測通用標準物質研制和應用的報道。

發明內容

本發明的目的就在于提供一個聚合常用篩查靶標的轉基因油菜SD-rapeseed及其應用。

本發明的目的是這樣實現的：

通過將常用的篩查元件聚合插入到常規油菜中，創制一種攜帶常用篩查元件的轉基因油菜；以轉基因油菜為候選物制備轉基因油菜篩查檢測通用標準物質，通過研制轉基因油菜篩查檢測通用標準物質解決我國轉基因油菜篩查檢測中缺乏標準物質的難題。

一、獲得聚合常用篩查靶標的單拷貝轉基因油菜SD-rapeseed的方法