[發(fā)明專利]一種快速區(qū)分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的引物及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710046474.3
• 申請(qǐng)日: 2017-01-22
• 公開（公告）號(hào): CN106701969B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉峰;樓寶;陳睿毅;徐冬冬;詹煒;王立改
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省海洋水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

一種快速區(qū)分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的引物及方法，屬于分子標(biāo)記鑒定領(lǐng)域。該引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本發(fā)明無需經(jīng)測序等復(fù)雜步驟，經(jīng)適宜的PCR擴(kuò)增后，能夠準(zhǔn)確鑒定雜交子代確實(shí)為雜交種，并且能夠區(qū)分小黃魚與雜交魚，從而為3種外形相近的魚類的種質(zhì)鑒定提供一種新的簡單、快捷的鑒定方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子標(biāo)記鑒定領(lǐng)域，具體涉及一種快速區(qū)分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的引物及方法。

背景技術(shù)

小黃魚和大黃魚都屬于四大海產(chǎn)，兩者肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，深受廣大消費(fèi)者的青睞。但是由于過度捕撈、環(huán)境變化等原因，小黃魚性早熟、日趨小型化現(xiàn)象日益明顯；大黃魚的野生資源極其稀少，其養(yǎng)殖群體品質(zhì)嚴(yán)重下降，經(jīng)濟(jì)效益明顯降低。雜交可以使生物的遺傳物質(zhì)從一個(gè)群體轉(zhuǎn)移到另一群體，是增加生物變異性的一個(gè)重要方法。不同類型的親本進(jìn)行雜交可以獲得變異性狀的重新組合，雜交后代中可能出現(xiàn)雙親優(yōu)良性狀的組合，甚至出現(xiàn)超親代的優(yōu)良性狀。因此，開展了小黃魚與大黃魚的雜交育種，培育出雜交子代，但是雜交子代是否確實(shí)為雜交種需要進(jìn)行鑒定。

常規(guī)使用鑒定雜交魚類的方法，主要從形態(tài)學(xué)方面進(jìn)行鑒定。然而，形態(tài)學(xué)鑒定有時(shí)并不一定準(zhǔn)確，存在很強(qiáng)的主觀因素，并且形態(tài)學(xué)鑒定在苗種期只能區(qū)分大黃魚與小黃魚、雜交魚，不能鑒定區(qū)分雜交種和小黃魚，因?yàn)楹髢烧咴谛螒B(tài)上較為相近，很容易混淆。分子遺傳標(biāo)記在魚類雜交種鑒定工作中正發(fā)揮著越來越重要作用，可以快速、高效和靈敏地檢測出基因組DNA的多態(tài)性，是當(dāng)前用于水產(chǎn)生物種質(zhì)鑒定與群體遺傳特性分析的主要標(biāo)記。利用電泳圖譜分析技術(shù)，以條帶的擴(kuò)增情況來反映物種的特異遺傳信息，操作方法簡單、結(jié)果分析方便。本發(fā)明在不處死魚種的基礎(chǔ)上，只需剪取少量鰭條，利用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)便很容易區(qū)分小黃魚和大黃魚，并且能鑒定兩者的雜交子代[小黃魚（♀）與大黃魚（♂）]確實(shí)為雜交種。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種快速區(qū)分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的引物及方法的技術(shù)方案。

所述的一種快速區(qū)分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的引物，其特征在于該引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQID No.2所示。

所述的一種快速區(qū)分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）提取大黃魚、小黃魚和小黃魚與大黃魚的雜交魚DNA；

2）對(duì)樣品DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

3）PCR 反應(yīng)結(jié)束后，取擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，并于紫外成像儀器中觀察、拍照及記錄，根據(jù)電泳圖譜結(jié)果與DNA片段條帶位置對(duì)比，在近250bp處有一個(gè)特異條帶，確定為小黃魚；在400bp左右處有一特異條帶，確定為大黃魚；雜交魚與大黃魚在相同位置具有一個(gè)特異條帶，從而判定該雜交魚確實(shí)為小黃魚與大黃魚的雜交種。

所述的一種快速區(qū)分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的方法，其特征在于所述步驟2）中PCR擴(kuò)增條件為：10×Buffer 2.5μl，dNTP 2.0μl，Taq酶0.2μl，上游引物和下游引物各1μl，DNA模板1μl，ddH₂O 18.3μl；PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min后進(jìn)入35個(gè)循環(huán)：94℃ 35sec，59℃ 35sec，72℃ 1.0min；最后72℃延伸10min；所述上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本發(fā)明無需經(jīng)測序等復(fù)雜步驟，經(jīng)適宜的PCR擴(kuò)增后，能夠準(zhǔn)確鑒定雜交子代確實(shí)為雜交種，并且能夠區(qū)分小黃魚與雜交魚，從而為3種外形相近的魚類的種質(zhì)鑒定提供一種新的簡單、快捷的鑒定方法。

附圖說明