[發明專利]一種快速區分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的引物及方法

有效

• 申請號: 201710046474.3
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106701969B
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發明（設計）人: 劉峰;樓寶;陳睿毅;徐冬冬;詹煒;王立改
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.一種快速區分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的引物，其特征在于該引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.一種快速區分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）提取大黃魚、小黃魚和小黃魚與大黃魚的雜交魚DNA；

2）對樣品DNA進行PCR擴增，擴增引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

3）PCR 反應結束后，取擴增產物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，并于紫外成像儀器中觀察、拍照及記錄，根據電泳圖譜結果與DNA片段條帶位置對比，在近250bp處有一個特異條帶，確定為小黃魚；在400bp左右處有一特異條帶，確定為大黃魚；雜交魚與大黃魚在相同位置具有一個特異條帶，從而判定該雜交魚確實為小黃魚與大黃魚的雜交種。

3.如權利要求2所述的一種快速區分小黃魚和大黃魚及判定小黃魚和大黃魚雜交種的方法，其特征在于所述步驟2）中PCR擴增條件為：10×Buffer 2.5μl，dNTP2.0μl，Taq酶0.2μl，上游引物和下游引物各1μl，DNA模板1μl，ddH₂O 18.3μl；PCR擴增反應條件為：94℃預變性5min后進入35個循環：94℃35sec，59℃35sec，72℃1.0min；最后72℃延伸10min。