[發(fā)明專(zhuān)利]從海藻中提取活性多糖的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710046367.0
• 申請(qǐng)日: 2017-01-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106832030A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 施春華;張美芬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 嵊州市派特普科技開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/00
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多糖提取技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種從海藻中提取活性多糖的方法。

背景技術(shù)

近年來(lái)，數(shù)量龐大，種類(lèi)繁多的海洋生物在食品、藥物、化妝品和生物材料等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，從海洋生物中提取分離生物活性物質(zhì)己成為天然產(chǎn)物研究的熱點(diǎn)。海洋生物最引人注目的是其豐富的藥用資源，科學(xué)家已從海洋生物中分離和鑒定出多種海洋天然活性物質(zhì)，其中許多具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤和抗凝血等生物活性作用，為研制開(kāi)發(fā)海洋新藥奠定基礎(chǔ)。與蛋白質(zhì)、脂肪、核酸等其他生物大分子相比，糖類(lèi)具有更強(qiáng)的親水性。海洋生物通過(guò)合成多糖類(lèi)物質(zhì)，以保持體內(nèi)生命活動(dòng)所需要的自由水分，來(lái)適應(yīng)海洋這個(gè)特殊的環(huán)境。多糖廣泛參與細(xì)胞識(shí)別、細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、代謝、胚胎發(fā)育、細(xì)胞癌變、病毒感染和免疫應(yīng)答等各項(xiàng)生命活動(dòng)，具有抗病毒、抗凝血、抗腫瘤、抗突變、抗?jié)儭⒖寡趸⒔笛呛徒笛壬锘钚裕蔀楝F(xiàn)代醫(yī)學(xué)和功能食品工作者共同關(guān)注的焦點(diǎn)。海藻多糖是海藻所含的各種高分子碳水化合物，占干重的20 ~ 70%，是海藻的主要成分。20世紀(jì)60年代以來(lái)，人們逐漸發(fā)現(xiàn)海藻多糖具有多方面的生物活性，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、活血化癖、抗衰老和保護(hù)肌體細(xì)胞等，且多數(shù)無(wú)毒，在開(kāi)發(fā)成為海洋藥物方面有較大的潛力。

現(xiàn)在已有很多關(guān)于多糖提取的報(bào)導(dǎo)，現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號(hào)為CN103497258B的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利，公開(kāi)了一種小麥麩皮活性多糖的提取純化方法，其步驟包括 ：預(yù)處理、脫脂、多糖提取和粗多糖精制，最后對(duì)提取的粗品和純化后組分的得率、化學(xué)組成以及免疫調(diào)節(jié)活性進(jìn)行了分析。該小麥麩皮活性多糖的提取純化方法，是利用水提醇沉法制得小麥麩皮多糖粗品，再利用瓊脂糖凝膠柱純化得到具有免疫調(diào)節(jié)活性的多糖，其提取方法簡(jiǎn)單，運(yùn)行成本低，所得的小麥麩皮粗多糖其得率為 5.0%，經(jīng)過(guò)純化小麥麩皮活性多糖其得率為5.6%，且具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)活性。

現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號(hào)為CN103265644B的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利，公開(kāi)了一種白僵蠶抗癌活性多糖BBPW-2的制備方法。白僵蠶粉經(jīng)丙酮 - 石油醚回流脫脂和 80% 乙醇回流除去苷類(lèi)和生物堿后，用蒸餾水于 80~100℃下提取出粗多糖。粗多糖經(jīng) Sevag法去除蛋白質(zhì)后，用 DEAE 瓊脂糖凝膠離子交換層析分離出中性多糖組分，再經(jīng)丙烯葡聚糖凝膠S-300 層析，取第 2 個(gè)洗脫峰，減壓濃縮后經(jīng)丙烯葡聚糖凝膠 S-200 層析進(jìn)一步純化，冷凍干燥得到白僵蠶抗癌活性多糖 BBPW-2。該方法制備的產(chǎn)物，純度均一，分子量為 2.0×10 ³ Da，對(duì)人宮頸癌細(xì)胞Hela和人肝癌細(xì)胞HepG2的生長(zhǎng)均有抑制作用，對(duì)正常細(xì)胞人胚胎腎細(xì)胞 HEK293 和小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7 生長(zhǎng)均無(wú)不良影響，可用于抗癌產(chǎn)品開(kāi)發(fā)。這兩種方法多糖的提取率低，有機(jī)溶劑用量大，對(duì)環(huán)境的污染大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種多糖提取率高，純度高，活性強(qiáng)，有機(jī)溶劑用量較少的從海藻中提取活性多糖的方法。

本發(fā)明針對(duì)背景技術(shù)中提到的問(wèn)題，采取的技術(shù)方案為：

從海藻中提取活性多糖的方法，具體步驟為：

1）脫脂、脫苷：將海藻洗凈，粉碎，過(guò)篩得到海藻粉末，加入丙酮-石油醚混合液回流脫脂，海藻粉末：丙酮-石油醚混合液體積比為1:10~15，丙酮：石油醚體積比為1：1.2~1:1.6。海藻中油脂在丙酮-石油醚混合液中溶解度大，海藻脫脂率高。抽濾，濾渣中加入乙醇回流，乙醇濃度為85~90%，濾渣：乙醇體積比為1:12~16，抽濾，濾渣烘干。海藻中的苷類(lèi)和生物堿在乙醇中溶解度高，多糖不溶于乙醇，在除雜的過(guò)程中多糖損失率少；

2）酶解：在步驟1最后得到的濾渣中加入蒸餾水，濾渣：蒸餾水體積比:1：25~28。復(fù)合酶制劑酶解，復(fù)合酶加入量為3~5%，酶解溫度為52~56℃，pH為2.7~3.4，酶解時(shí)間為2.2~2.7h。復(fù)合酶制劑成份及其重量份為：10~20份纖維素酶、10~15份果膠酶、1~3份NaCl、0.001~0.002份焦磷酸鉀、0.5~1份硫酸鎂、0.004~0.006份聚磷酸銨和0.2~0.8份磷酸二氫鈣。上述復(fù)合酶制劑酶解纖維素和果膠的效率高，并且酶解充分，對(duì)細(xì)胞壁的破壞率高。超聲波助溶，超聲頻率為260~320W，超聲時(shí)間為20~30min。酶解結(jié)束后沸水浴滅酶，過(guò)濾，取濾液。酶解將纖維素與果膠水解，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，并且輔以超聲波提取，活性多糖從海藻細(xì)胞中流出溶解于水中，活性多糖的提取率高；