[發明專利]一種對蝦養殖中嗜水氣單胞菌的Lamp檢測方法

在審

• 申請號: 201710046232.4
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106755487A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 王文琪;徐申波;任貽超;王鑫;張艷
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種對蝦養殖中嗜水氣單胞菌的Lamp檢測方法，其特征在于快速檢測致病菌，其步驟是：

(1)、嗜水氣單包菌菌種的培養；

(2)、嗜水氣單胞菌染色體DNA的提取；

(3)、引物的設計；

(4)、提模板；

(5)、LAMP反應體系的建立。

2.根據權利要求1所述的一種對蝦養殖中嗜水氣單胞菌的Lamp檢測方法，其特征在于：所述嗜水氣單包菌菌種的培養方法是：(1)、取保藏的從養殖對蝦體內分離的嗜水氣單胞菌，在營養肉汁瓊脂平板培養基中進行平板劃線分離單菌落，放入恒溫箱28～30℃倒置培養24h；(2)挑取單菌落接種至3ml的液體培養基(試管)中，放入28～30℃100r/min搖床培養12h；(3)將試管中培養的菌轉接入120ml的液體培養基中相同條件下培養12h，4℃下保存備用。

3.根據權利要求1所述的一種對蝦養殖中嗜水氣單胞菌的Lamp檢測方法，其特征在于：所述嗜水氣單胞菌染色體DNA的提取方法是：移液槍取一嗜水氣單胞菌菌落,接種于營養肉湯,于28℃培養18～24h。

4.根據權利要求1所述的一種對蝦養殖中嗜水氣單胞菌的Lamp檢測方法，其特征在于：所述提模板的方法是：取1ml嗜水氣單胞菌染色體DNA培養液于離心管中，12000r/min離心5min，去掉上清液然后加入100ul無菌水混合，100℃水浴加熱10min，冰浴2min，12000r/min離心5min，保留上清液備用。

5.根據權利要求1所述的一種對蝦養殖中嗜水氣單胞菌的Lamp檢測方法，其特征在于：建立針對該細菌的LAMP反應體系的建立包括溫度實驗、時間實驗、對照實驗、敏感性實驗、特異性實驗。