[發明專利]一種用于檢測傳單患者EB病毒FISH檢測探針

在審

• 申請號: 201710046074.2
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106755590A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 曹鵬飛;向娟娟;賀玉香;李桂源;趙謝蘭;徐雅靖;付斌;盧景琛
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李佳

技術領域

本發明涉及醫學診斷技術領域，具體而言，涉及一種用于檢測傳單患者EB病毒FISH檢測探針及其制備方法。

背景技術

自從1964年Epstein和Barr等在淋巴瘤細胞系中發現了EB病毒顆粒以來，人們對EBV的認識進入了嶄新的階段。EBV與人類多種感染性疾病如傳染性單核細胞增多癥、慢性活動性EBV感染、EBV相關的噬血細胞增多綜合征、移植后淋巴組織增生癥及淋巴瘤、鼻咽癌及胃癌等多種惡性腫瘤密切相關。

傳染性單核細胞增多癥(infectious mononucleosis,IM)是一種急性全身淋巴細胞增生性疾病，常在兒童期或青春期初期感染較大量的EBV時發病，主要由飛沫與唾液經呼吸道傳播，其次通過密切接觸傳播，潛伏期約40天。IM的典型特征包括不規則發熱，咽喉炎，淋巴結腫大，全身乏力，以及外周血非典型淋巴細胞增多。脾肝腫大，黃疸和脾破裂等并發癥十分罕見。其病程通常持續數天至數周，臨床常認為其呈自限性。有文獻稱，近年來EBV感染兒童逐年增多，夏秋較冬春季節常見，且半數兒童感染EBV后表現為IM，且臨床表現趨于多樣化。一般情況下IM以抗病毒及對癥支持治療為主，預后較好。

但少數IM患兒臨床表現呈爆發性過程，出現嚴重并發癥，累及全身多個系統并造成多臟器損害，臨床稱為重癥IM(severe infectiousmononucleosis,SIM)或致死性IM(fatal infectious mononucleosis，FIM)，其中約80％FIM可進一步進展為EBV-AHS。然而目前國內對于重癥IM并沒有統一認識及診斷標準，臨床上主要依據患者癥狀輕重以及并發癥來判斷其病情輕重程度，以便與普通IM區分。有研究認為IM患者有2個系統以上受損即可診斷為重癥IM，曾有學者進行過統計分析發現重癥IM如不及時治療死亡率高達92.3％。所以如何及時并且準確診斷SIM，對于病人的治療及預后十分關鍵。

因EBV的分離相對困難，所以臨床一般采用血清學方法作輔助診斷。但當機體免疫低下時，則很難用血清學結果分析，所以在EBV感染中應用分子診斷學方法十分必要。目前常見EBV的臨床檢測項目有外周血涂片進行異型淋巴細胞計數、嗜異性凝集試驗、EBV抗體檢測(包括EBV-VCA-IgM，EBV-VCA-IgG)、PCR檢測EBV-DNA。

外周血涂片異淋計數以及嗜異性凝集試驗均為非特異性試驗。多數IM患者異淋計數超過10％，但除EBV外的其他病毒如巨細胞病毒(cytomegalovirus)、登革病毒(Dengue virus)等，或某些藥物感染也可引起同樣反應。嗜異性凝集試驗在起病后1-2周可出現陽性，3-4周達到高峰，陽性率據稱80％以上，但是少數病例該實驗結果始終陰性。另外感染過程的早期常出現嗜異性凝集試驗假陰性。

EBV-VCA-IgM是IM急性期重要的診斷指標，出現在EBV感染早期，通常在4-6周消失，所以此項指標與病人入院時間有密切關系，加之實驗結果也常受到實驗人員操作方式、診斷試劑盒檢出率的影響，常常不能準確反應病人情況。EBV-VCA-IgG出現在EBV感染的急性期，發病后2-4周達到高峰，略微下降后持續終生，所以這一指標目前多用于流行病學統計。

臨床上常用且較為可靠的指標僅有PCR檢測EBV-DNA結果。PCR是20世紀80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術，由Mullis首次報道，通過體外擴增可以將目的基因片段百萬倍地放大，從而極大地提高核酸分子檢測的靈敏度。PCR具有特異性強、靈敏度高、重復性好、簡便快速、易自動化以及產率高等優點。但正由于PCR使DNA拷貝數呈指數增長，所以極微量的模板污染就可以造成假陽性出現。其次在標本采集、運輸及處理過程中也易發生污染。另假陰性也是其反應過程中易出現的一個不可忽視的問題，這類問題大多數與標本處理、PCR試劑過期或PCR儀器故障有關。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒FISH檢測探針，以解決上述問題。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種用于檢測傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒FISH檢測探針，所述探針為EB病毒BamHI-W片段經過標記得到；

所述BamHI-W片段的核苷酸序列為EBV基因組13232-16189所示。