[發明專利]一種用于檢測傳單患者EB病毒FISH檢測探針

在審

• 申請號: 201710046074.2
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106755590A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 曹鵬飛;向娟娟;賀玉香;李桂源;趙謝蘭;徐雅靖;付斌;盧景琛
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李佳

1.一種用于檢測傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒FISH檢測探針，其特征在于，所述探針為EB病毒BamHI-W片段經過標記得到；

所述BamHI-W片段的核苷酸序列為EBV基因組13232-16189所示。

2.根據權利要求1所述的FISH檢測探針，其特征在于，所述標記采用Biotin-dUTP標記。

3.一種用于檢測傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒FISH檢測探針的制備方法，其特征在于，包括：

培養EB病毒并提取EB病毒DNA作為模板，PCR擴增EB病毒BamHI-W片段，對所述BamHI-W片段進行標記得到標記產物；純化所述標記產物后得到EB病毒FISH檢測探針。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，培養EB病毒所用的宿主細胞為P3hr-1細胞。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，擴增EB病毒BamHI-W片段所用的上游引物核苷酸序列為：

5’-CTTCTCTCTGTCCCCCTGCTCCTCT-3’；

下游引物核苷酸序列為：

5’-CTAGGGTCCCTTCTGGGGGACATCCT-3’。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，在所述擴增的反應程序中，Tm值為53～57℃，反應循環次數為30～34次。

7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，對所述BamHI-W片段進行標記的方法包括：

1)、將BamHI-W片段DNA加入水中98～100℃變性7～13分鐘；

2)、按照1g BamHI-W片段DNA：3.5～4.5μL Biotin-High prime的比例加入所述Biotin-High prime，瞬時離心，36～38℃水浴8～16h；

3)、63～67℃加熱8～12分鐘終止標記得到標記產物。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，純化所述標記產物的操作包括：

a)、按體積份數計，將17～23份標記產物、8～12份7.5M的醋酸銨、0.6～1.4份魚精DNA、70～110份冰冷的無水乙醇混合并于-75～85℃沉淀60～70min；

b)、0～6℃，11000～13000rpm離心15～25min后棄上清；

c)、加入73～77％乙醇洗滌1～2次，0～6℃，11000～13000rpm離心15～25min；

d)、棄上清，風干沉淀，用FISH雜交液重懸。

9.一種用于檢測傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒的試劑盒，其包含權利要求1或2所述的FISH探針。

10.權利要求1或2所述的FISH探針在制備檢測傳染性單核細胞增多癥患者EB病毒的試劑或試劑盒中的應用。