[發明專利]抗核抗體靶抗原偶聯物試劑、其制備方法、包含其的試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201710044365.8
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN108333347B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 饒微;張云;袁錦云;孫志成;李婷華;羅凱
• 申請（專利權）人: 深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 趙囡囡;吳貴明

本發明提供了一種抗核抗體靶抗原偶聯物試劑、其制備方法、包含其的試劑盒及應用。其中，抗核抗體靶抗原偶聯物試劑包括抗原?磁性微球偶聯物，抗原?磁性微球偶聯物包括細胞提取物靶抗原包被磁性微球形成的第一偶聯物以及純化靶抗原包被磁性微球形成的第二偶聯物。通過將自身免疫性疾病相關的多種純化靶抗原包被磁性微球，并輔以包被細胞提取物的磁性微球，這樣形成的抗核抗體靶抗原與磁球的偶聯物，與單純用混合的純化靶抗原包被磁性微球的偶聯物相比，具有更完整的抗原譜，能夠提高陽性檢出率，具有更好的臨床檢測靈敏度。與單純包被細胞提取物的偶聯物相比，能夠極大地降低非特異性，提高檢測特異性、靈敏度以及陽性檢出率，同時減少假陽性。

技術領域

本發明涉及抗核抗體檢測領域，具體而言，涉及一種抗核抗體靶抗原偶聯物試劑、其制備方法、包含其的試劑盒及應用。

背景技術

抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)又稱抗核酸抗原抗體，是一組將自身真核細胞的各種成分脫氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取性核抗原(ENA)和RNA等作為靶抗原的自身抗體的總稱。傳統定義是將針對細胞核內成分的抗體稱為ANA，廣義定義是針對細胞內所有抗原成分的自身抗體的總稱。現在對ANA靶抗原的理解不再僅僅局限于核成分，已從細胞核擴大到整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架等，一些ANA靶抗原成分(如SSA/RO、Jo-1、rRNP等)在核仁和胞漿內比核質內更豐富。ANA能與所有動物的細胞核發生反應，主要存在于血清中，也可存在于胸水、關節滑膜液和尿液中。抗核抗體的抗體主要為IgG型，也見于IgM、IgA，甚至LgD及LgE中。

自身抗體的產生是自身免疫性疾病的基本特征之一，因而，自身抗體本身就成為大多數自身免疫性疾病的血清學標志物。現階段，研究發現與ANA相關的自身免疫性疾病主要包括系統性紅斑狼瘡、混合型結締組織疾病、干燥綜合征、局限性系統硬化癥、彌散性系統硬化癥、多肌炎、皮肌炎和原發性膽汁性肝硬化，其中研究比較清楚與上述疾病密切相關的主要包括Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、CENP B、dsDNA、核小體、組蛋白抗原、核糖體P蛋白和線粒體等靶抗原對應的抗體，隨著新的與疾病相關的抗核抗體被鑒定而不斷完善。ANA靶抗原主要是通過Hep-2或HeLa細胞提取，豬心組織或小牛胸腺組織提取，或者重組表達獲得。

由于細胞核中存在至少上百種ANA相對應的靶抗原，因此，ANA的檢測非常復雜，在與ANA相關的自身免疫性疾病檢測中，試劑的檢測靈敏度和特異性對于臨床疾病的診斷與判斷具有重要意義。ANA的檢測特異性與檢測靈敏度與檢測方法和核抗原的制備方法密切相關。

目前，臨床檢測抗核抗體的常見方法主要包括間接免疫熒光法、免疫印跡法、斑點免疫結合法、酶聯免疫吸附法、化學發光法等。現階段間接免疫熒光發依然是ANA篩查金標準，一般通過將鼠肝細胞或者Hep-2細胞切片固定在載玻片作為靶抗原，Hep-2細胞具有核抗原豐富、特異性強、含量高等特征。使用Hep-2細胞制備的抗原片可以檢測出一些鼠肝(腎)切片呈陰性或反應弱的樣本，較傳統的鼠肝(腎)切片具有更好的檢測靈敏度。但該方法還處于最開始的間接免疫熒光技術，很難定量檢測，也容易出現假陽性，檢測靈敏度和特異性還有待提高，另外難以標準化和自動化。

比如，現有技術有報道：通過顯微圖像灰度分析經過間接免疫熒光反應的Hep-2細胞核熒光片強度來表征人血清中均質性或斑點型抗核抗體的濃度。該方法能夠很大程度上消除實驗操作者判斷的主觀因素和檢測儀器差異性帶來的負面影響，從而使檢測結果更精確和客觀可行。但該方法使用間接免疫熒光技術，檢測靈敏度和特異性還有待提高。

酶聯免疫吸附法、免疫印記法和斑點免疫結合法近些年在ANA檢測中越來越廣泛，該方法基本都是將多種純抗原包被于為微孔板或者纖維膜上，該方法可以避免細胞質各種干擾，較間接免疫熒光發特異性更好，但是同樣存在操作繁瑣，準確度和精密度較差，檢測項目組合有限，難以實現自動化和高通量檢測以及陽性檢出率偏低的缺陷。