[發明專利]一種高活性木瓜蛋白酶的制備工藝

在審

• 申請號: 201710042619.2
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106754834A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 范遠景;龔濤;劉培志;王明和;姚勇;徐柳;楊簦玲;婁鵬祥;童今注
• 申請（專利權）人: 合肥工業大學
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50
• 代理公司: 合肥金安專利事務所34114
• 代理人: 金惠貞

1.一種高活性木瓜蛋白酶，其特征在于：所述木瓜蛋白酶為木瓜蛋白酶的粗制產品，為淺黃色粉末，水溶性良好，酶活達到1.55萬U/g。

2.制備權利要求1所述一種高活性木瓜蛋白酶的方法，其特征在于具體操作步驟如下：

（1）制備宣木瓜漿

將新鮮宣木瓜洗凈，去皮、去仔，分割成小塊，按質量比1：1加入蒸餾水，榨汁打漿，得到宣木瓜漿；

（2）制備宣木瓜汁

在宣木瓜漿中加入復合酶，攪拌均勻，在溫度40～50℃條件下酶解反應1.5～2h，得到酶解宣木瓜汁；所述復合酶由纖維素酶和果膠酶組成，復合酶的加入量為宣木瓜漿質量的0.6～1.2%；

（3）抽濾

將酶解宣木瓜汁抽濾去除濾渣，得新鮮宣木瓜汁；

（4）離心分離

將新鮮宣木瓜汁離心分離，取上清液，溫度1～4℃條件下冷藏備用；

（5）制備復合溶液

在上清液中加入濃度75%的乙醇和復合保護劑，用濃度0.1mol/L的氫氧化鈉（NaOH）調節pH值為6.0-8.0，靜置10～12h，得到復合溶液；

所述復合保護劑由半胱氨酸（L-cys）和乙二胺四乙酸（EDTA）組成；

（6）制備木瓜蛋白酶

將復合溶液離心取沉淀，冷凍干燥至恒重，得到木瓜蛋白酶。

3.根據權利要求2所述一種高活性木瓜蛋白酶的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，榨汁時間為3min。

4.根據權利要求2所述一種高活性木瓜蛋白酶的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，纖維素酶的酶活為5萬U/g，果膠酶的酶活為10萬U/g；復合酶中纖維素酶：果膠酶的質量比為8:1。

5.根據權利要求2所述一種高活性木瓜蛋白酶的制備方法，其特征在于：步驟（3）中，抽濾過120目雙層濾布。

6.根據權利要求2所述一種高活性木瓜蛋白酶的制備方法，其特征在于：步驟（4）中，離心分離的轉速為3500rpm，時間為15min。

7.根據權利要求2所述一種高活性木瓜蛋白酶的制備方法，其特征在于：步驟（5）中，按1：1的體積比在上清液中加入濃度75%的乙醇；半胱氨酸（L-cys）的添加量為0.06mol/L，乙二胺四乙酸（EDTA）的添加量為0.004mol/L。

8.根據權利要求2所述一種高活性木瓜蛋白酶的制備方法，其特征在于：步驟（6）中，離心分離的轉速為5500rpm，時間為10～15min；冷凍干燥溫度為﹣40℃。