[發(fā)明專利]檢測禽流感病毒與雞細小病毒的成套試劑與方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710041372.2
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106636472B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝芝勛;何瑩;羅思思;李孟;謝麗基;鄧顯文;奉彬;黃嬌玲;張艷芳
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中，檢測禽流感病毒與雞細小病毒的成套試劑與方法。

背景技術(shù)

禽流感(Avian influenza，AI)是禽流行性感冒的簡稱，是一種由A型流感病毒引起的禽類(包括家禽和野禽)的感染，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)和我國規(guī)定為A類動物疫病。根據(jù)禽流感致病性的不同，可分為高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(LPAI)，其中以高致病性禽流感最為嚴重，該病毒不僅會在家禽中迅速傳播，造成極高的死亡率，還會跨越物種傳染屏障，從禽類傳染到了人類。隨著禽流感在我國以及全球頻繁暴發(fā)，疫情范圍不斷擴大，禽流感暴發(fā)對經(jīng)濟和社會的影響已成共識，其影響程度將隨著全球化發(fā)展日益加劇。雞細小病毒(Chincken parvovirus，ChPV)是一種線性單鏈DNA病毒，ChPV是引發(fā)病毒性腸道疾病的病原體之一，其特征是發(fā)育不良、腹瀉、飼料轉(zhuǎn)化率低、高死亡率，尤其在幼禽腸炎中表現(xiàn)更高的死亡率。可見，這兩種病毒引發(fā)的疾病對養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展造成嚴重的危害。

病原分離鑒定是針對病毒性疾病診斷常規(guī)的方法，但是該方法耗時長，針對多種病毒混合感染時又難以進行快速鑒別診斷。由于ChPV復(fù)制方式上具有獨特性，在雞胚和細胞中難以正常增殖，進一步加大該病毒的診斷難度。PCR技術(shù)直接以病原體的RNA或DNA為研究對象，檢測組織中是否存在病原的核酸，可以快速準確的診斷出其有無病原體感染。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何同時檢測禽流感病毒與雞細小病毒。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了檢測或輔助檢測禽流感病毒與雞細小病毒的成套試劑。

本發(fā)明所提供的檢測或輔助檢測禽流感病毒與雞細小病毒的成套試劑，由名稱為M-P的引物對和名稱為ChPV-P的引物對組成；

所述M-P由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的兩條單鏈DNA(即M-F和M-R)組成；所述ChPV-P由序列表中SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的兩條單鏈DNA組成(即ChPV-F和ChPV-R)。

上述成套試劑中，所述M-P與所述ChPV-P均可獨立包裝。所述M-P的兩條單鏈DNA均可獨立包裝。所述M-P的兩條單鏈DNA的摩爾比可為1:1。所述ChPV-P的兩條單鏈DNA均可獨立包裝。所述ChPV-P的兩條單鏈DNA的摩爾比可為1:1。

上述成套試劑中，所述M-P與所述ChPV-P可以單獨使用分別進行單獨的PCR，也可以組合使用進行二重PCR。

這兩種引物對單獨使用時，本申請的檢測或輔助檢測禽流感病毒與雞細小病毒的成套試劑中這兩種引物對的配比沒有要求。這兩種引物對組合使用時，所述M-P與所述ChPV-P的摩爾比為3：5。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了PCR引物對。

本發(fā)明所提供的PCR引物對為所述M-P和所述ChPV-P。所述M-P為檢測或輔助檢測禽流感病毒的引物對，所述ChPV-P為檢測或輔助檢測雞細小病毒的引物對ChPV-P。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了檢測或輔助檢測禽流感病毒與雞細小病毒的系統(tǒng)。

本發(fā)明所提供的檢測或輔助檢測禽流感病毒與雞細小病毒的系統(tǒng)含有所述成套試劑。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了檢測或輔助檢測禽流感病毒的系統(tǒng)。

本發(fā)明所提供的檢測或輔助檢測禽流感病毒的系統(tǒng)含有所述M-P。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了檢測或輔助檢測雞細小病毒的系統(tǒng)。

本發(fā)明所提供的檢測或輔助檢測雞細小病毒的系統(tǒng)含有所述ChPV-P。

上述各系統(tǒng)均還可包括DNA聚合酶。所述DNA聚合酶具體可為北京全式金生物技術(shù)有限公司的2×Easy Taq PCR Super Mix中DNA聚合酶。

上述各系統(tǒng)還均可包括進行PCR擴增的儀器。

所述檢測或輔助檢測禽流感病毒與雞細小病毒的系統(tǒng)可由所述成套試劑與所述DNA聚合酶組成。所述檢測或輔助檢測禽流感病毒的系統(tǒng)可由所述M-P與所述DNA聚合酶組成。所述檢測或輔助檢測雞細小病毒的系統(tǒng)可由所述ChPV-P與所述DNA聚合酶組成。

上述各系統(tǒng)均可為試劑或試劑盒。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了非診斷目的的檢測禽流感病毒和雞細小病毒的方法。