[發明專利]一種鑒定嘎拉蘋果后代植株的SSR分子標記II及其應用

有效

• 申請號: 201710040798.6
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106755483B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 肖蓉;曹秋芬;張春芬;侯麗媛;聶園軍;鄧舒;李倩;王曉清;溫鑫;秦永軍
• 申請（專利權）人: 山西省農業科學院果樹研究所;山西省農業科學院生物技術研究中心;山西省農業科學院農業資源與經濟研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 太原晉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 王瑞玲

1.一種鑒定嘎拉蘋果后代植株的SSR分子標記II的應用，其特征是包括以下步驟：

（1）以蘋果基因組DNA為PCR擴增模板，以嘎啦蘋果基因組DNA為PCR擴增模板，分別使用SSR分子標記II的兩對引物，進行PCR擴增，反應體系為15μL，其中含10×PCR Buffer 1.5 μL、2.5 mM dNTPs mixture 1.2μL、10ng/μL Primers F 1.5μL、10ng/μL Primers R 1.5μL、5U Taq 聚合酶0.15μL、100ng/μL DNA模板0.75 μL，去離子水補足至15μL；

（2）擴增程序為：94℃預變性2 min 30 s，94℃變性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸40s，35個循環，72℃10 min，4℃保存備用；

（3）PCR產物檢測，用8%非變性聚丙烯酰胺電泳，將PCR的每個反應產物加入1/2的非變性Loading Buffer，混勻，150V恒定電壓150min，冰醋酸固定，AgNO₃ 染色拍照；

（4）用于花藥培養植株鑒定時，待測蘋果能擴增出上述SSR分子標記II的兩對引物中相對應的單獨的一條特異性條帶，說明待測蘋果植株為純合材料，如出現兩條條帶，則待測蘋果植株不是純合材料；

所述SSR分子標記II由LG3 標記CH03g07、LG11 標記Hi16d02組成，SSR分子標記II的兩對引物在檢測過程中同時使用，所述引物的序列為：

LG3 標記CH03g07:

上游：5^，- AATAAGCATTCAAAGCAATCCG -3^，

下游：5^，- TTTTTCCAAATCGAGTTTCGTT -3^，

LG11 標記Hi16d02：

上游：5^，- AACCCAACTGCCTCCTTTTC -3^，

下游：5^，- GTTTCGACATGATCTGCCTTG -3^，。